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利用CRISPR/Cas9基因編輯技術探討水稻GA20-oxidase基因的功能及其應用

為了解決固特異act 225 45 r17的問題，作者李世傑 這樣論述：

於1960年，育種學家利用傳統雜交育種的方式，將矮株品系低腳烏尖與高株、高產量品系Peta進行雜交，得到半矮化的新品系 IR8，因其植株莖桿較粗壯、穩固，當施以高劑量氮肥時，植株抽長後相較於其他高株品系水稻有不易倒伏脫粒的優勢，因此具有良好的產量。而後，科學家發現半矮基因 SEMIDWARF1 (SD1)，因其合成植物荷爾蒙吉貝素 (Gibberellin, GA) 相關基因 OsGA20 oxdiase 2 (OsGA20ox2) 喪失功能，導致植株GA含量不足，因此有半矮性狀。然而，水稻OsGA20oxs 基因家族成員共有四個，目前僅OsGA20ox2 被應用於水稻育種，針對水稻其他基因

家族成員是否可以用於品種改良仍然未知，此外，針對於四個基因家族成員藉由資料庫搜尋得知個組織部位具有表現量差異，推測OsGA20oxs基因家族成員之功能可能存在組織特異性需進一步驗證。本研究利用CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-associated protein 9) 基因編輯系統可針對目標基因進行突變之優勢，各別對OsGA20oxs基因成員進行突變，並比較突變株之生理功能差異。本研究發現，osga20ox1突變株外表呈白化狀，針對OsGA20oxs基因家族成員於各組織表現量資料庫分析得

知，OsGA20ox1於胚胎發育時期有較高之表現，因此推測OsGA20ox1具有調控葉綠體分化之可能性。osga20ox2突變株相較於野生株有半矮化之性狀，此性狀與前人研究一致，推測OsGA20ox2藉由調控莖桿GA含量而影響株高度。osga20ox3 突變株其稔實率極低，並且在後代基因型分析結果未得到完全基因剔除之突變株，暗示若完全剔除OsGA20ox3 可能使植株無法產生後代；此外，由基因家族成員於各組織表現量資料庫分析，得知OsGA20ox3於雄蕊中有較高之表現量，因此推測OsGA20ox3可能藉由調控花藥內GA含量，進而影響稔實。在osga20ox4 不同編輯形式突變株中，有一個獨立的

品系相較於野生型株高較高，此性狀與過去研究所得到osga20ox4半矮突變株不相符，然而其基因功能目前仍未有定論，待進一步研究。綜上所述，本研究發現OsGA20oxs基因家族成員間基因功能具有差異性，除了osga20ox1突變株的白化性狀、osga20ox3突變株的不稔實性狀以及osga20ox4的高株性狀，僅有osga20ox2具有與IR8相似辦矮化的性狀。

設計、合成與評估具生物活性之二氟尼柳衍生物 與開發具多重藥理潛力之小分子藥物

為了解決固特異act 225 45 r17的問題，作者李佳駿 這樣論述：

二氟尼柳是一種非固醇類抗發炎藥。在臨床上，它已被核准作為治療疼痛與炎症相關的疾病。本論文研究將對於此結構做為藥物設計之基礎，設計與開發一系列的新穎的5-(2',4'-二氟苯基)-水楊醯苯胺的衍生物，並評估它們的生物活性。所有合成出來之化合物分別藉由抗酒石酸磷酸酶與細胞存活率之分析來篩選其抗骨吸收與抗腫瘤活性。在此系列化合物中，以化合物6d和7d為較具有可能抑制藉由細胞核因子kappa B 配位體的接受器活化素 (RANKL) 誘導蝕骨細胞分化之專一性抑制劑。在活體外之實驗，證實它們的抑制活性，包括經由特異性抑制RANKL誘導的細胞核因子kappa B (NF-kB) 和活化T细胞核因子 (N

FATc1) 的介導活化。除此之外，6d和7d 在前列腺癌細胞株 (PC-3) 還具有抗腫瘤增生之活性， 其半抑制濃度 (IC50) 分別為0.64 μM 和 0.26 μM。其它化合物在PC-3細胞株中也具有抗腫活性，其半抑制濃度值介於0.05-3.71 μM。此外， 美國癌症研究中心在一系列的化合物中篩選出8個化合物6a，6b，6j，6k，7a，7i，7j和7k，其中以7j在此系列中最具活性，其半抑制濃度為0.59 M。而6a和7a在化合物當中，不僅表現出強效的抗腫瘤增生活性，但也衰減了細菌脂多醣體 (LPS)-誘導炎症反應。這些結果說明，5-(2',4'-二氟苯基)-水楊醯苯胺可能可做

為藥物設計之一個具潛力的先導藥物，其可能作用的標靶在往後之研究上將可以進一步檢驗。