工科 系 PTT的問題，透過圖書和論文來找解法和答案更準確安心。 我們找到下列包括價格和評價等資訊懶人包

牡丹

為了解決工科 系 PTT的問題，作者陳乃雄 這樣論述：

一九三八年大戰前夕，歲月尚且靜好 一段人與非人的愛戀故事悄悄發生 　　牡丹要出閣了，嫁給總是撐著黑傘的林少爺 　　但街庄都傳說著，在命案之後，林少爺已經是個活死人…… 　　日治時期的《暮光之城》、東方風味的噬血純愛 　　PTT Marvel板爆文，台灣鄉野異色浪漫譚 　　牡丹早年喪母，父親又好賭，她和祖母共同咬牙撐持著生計、並以長姊的身分照顧著幼弟。早到適婚年齡的她，雖然對愛情有著憧憬、也接受了讓生活熄滅這小小憧憬，卻從未想過自己的婚姻竟是為了償還父親的賭債，才被賣給後山的林家少爺當做媳婦。後山的林家原本是個望族，在十年前發生了滅門血案後，僅剩公子林春生倖存。 　　「其實我要出嫁了，

但我從沒見過未婚夫。」牡丹幽幽地說。 　　「是嗎？或許在什麼地方見過呢？」男子歪著頭問。 　　「若對方能跟您一樣是個好人就好了。」牡丹對男子無奈笑著。 　　「會的。」男子對牡丹點點頭，「一定會的。」 　　嫁入了林家後，牡丹才發現春生就是近日來常不期而遇的青年，雖然因此放下了心防，她卻發現春生行事神祕，似乎有些什麼無法對她言說的事。另一方面，春生的確瞞著牡丹暗中行動——一切都與十年前的血案、以及和春生曾有媒妁之言的那名女子有關…… 本書特色 　　★台灣歷史與奇幻結合的純愛故事 　　★日治時期漢文化、日本文化與西方文化的精彩交織 　　★PTT Marvel板人氣作品完整新修 名人推薦 　

　殺人系小說家　崑崙　專序推薦 　　小說家　D51　路邊攤 　　感動推薦  

工科 系 PTT進入發燒排行的影片

分手失落者的自由書寫經驗探究

為了解決工科 系 PTT的問題，作者洪凱婷 這樣論述：

本研究旨在探究分手失落者的自由書寫經驗以及分手失落者接受自由書寫對情傷復原歷程的影響，採質性研究取向，以半結構深度訪談法蒐集資料，並以主題分析法進行資料分析。透過臉書貼文分享以及PTT男女板公告研究參與者招募訊息，最終有六位研究參與者完成自由書寫計畫，每位研究參與者皆進行每周至少三次，每次至少十五分鐘的自由書寫，且為期四周，並於書寫完成後接受訪談。本研究經由主題分析法，分別以不同的主題內涵呈現研究結果。一、分手失落者的自由書寫經驗： （一）保有個人習慣並懷抱著期待與疑慮投入自由書寫；（二）向內與自我的對話，向外與他人的連結；（三）整理想法並客觀分析，了解自己與事件脈絡；（四）憶昔日，望今日，

心情隨之而變化；（五）自在書寫，讓文字承載所思所感，成為創作泉源；（六） 自由書寫經驗與感受的回饋與建議。二、分手失落者接受自由書寫對情傷復原的影響：（一）找回自信而更加珍視自己的價值；（二）對於感情有新的體會；（三）情感有所寄託與抒發；（四）思考方式的轉變；（五）期許並鼓勵自己；（六）增加對自我的瞭解也獲得成長。基於上述研究結果，進行討論並對後續研究與實務工作領域提出相關建議。

牡丹（台灣花布手帕限量贈品版）

為了解決工科 系 PTT的問題，作者陳乃雄 這樣論述：

特別限量贈品：台灣花布手帕（暗夜黑、濃情紅兩款隨機出貨，數量有限送完為止） 一九三八年大戰前夕，歲月尚且靜好 一段人與非人的愛戀故事悄悄發生 　　牡丹要出閣了，嫁給總是撐著黑傘的林少爺 　　但街庄都傳說著，在命案之後，林少爺已經是個活死人…… 　　日治時期的《暮光之城》、東方風味的噬血純愛 　　PTT Marvel板爆文，台灣鄉野異色浪漫譚 　　牡丹早年喪母，父親又好賭，她和祖母共同咬牙撐持著生計、並以長姊的身分照顧著幼弟。早到適婚年齡的她，雖然對愛情有著憧憬、也接受了讓生活熄滅這小小憧憬，卻從未想過自己的婚姻竟是為了償還父親的賭債，才被賣給後山的林家少爺當做媳婦。後山的林家原本是個望族，

在十年前發生了滅門血案後，僅剩公子林春生倖存。 　　「其實我要出嫁了，但我從沒見過未婚夫。」牡丹幽幽地說。 　　「是嗎？或許在什麼地方見過呢？」男子歪著頭問。 　　「若對方能跟您一樣是個好人就好了。」牡丹對男子無奈笑著。 　　「會的。」男子對牡丹點點頭，「一定會的。」 　　嫁入了林家後，牡丹才發現春生就是近日來常不期而遇的青年，雖然因此放下了心防，她卻發現春生行事神祕，似乎有些什麼無法對她言說的事。另一方面，春生的確瞞著牡丹暗中行動——一切都與十年前的血案、以及和春生曾有媒妁之言的那名女子有關…… 本書特色 　　★台灣歷史與奇幻結合的純愛故事 　　★日治時期漢文化、日本文化與西方文化的

精彩交織 　　★PTT Marvel板人氣作品完整新修 名人推薦 　　殺人系小說家　崑崙　專序推薦 　　小說家　D51　路邊攤 　　感動推薦     作者簡介 陳乃雄 　　批踢踢Marvel板屢屢爆文大手，獨立樂團胭脂虎吉他手／主唱。1994年生於宜蘭，希望透過不同領域重建台灣錯綜複雜文化之中的美學、重新建立歷史表象的同時，找回台灣人對本土文化的認同。 繪者簡介 渣子JAZ 　　復興商工美工科畢業，擅長插畫 　　喜歡鮭魚，還有貓 　　喜歡宗教和喪文化 　　還喜歡買玩具 　　二十四小時都想睡     推薦序：寧靜盛開於一九三八的花◎崑崙 一、一九三八 二、鬼

宅新娘 三、林府血案 四、つばくら 五、吸血妖魅考 六、宿命 七、終焉     推薦序 寧靜盛開於一九三八的花 　　我記得那是某個無聊的下午。 　　趁著能偷閒的時候上了PTT，想當個趁職的嘴砲鄉民，結果在Marvel板看到一篇被噓到XX的文。 　　這邊跟大家介紹一下，在Marvel板要被噓到XX不是容易的事情，可以說是達成某種驚人成就。因為Marvel板的鄉民基本上都滿客氣友善的，所以能被噓到XX的文不是故意來亂的，就是不知所云。 　　好奇之下我點進那篇被噓到XX的「跟男朋友吃義大利麵」一看究竟。 　　不看還好，看完真的是滿腦子「這到底是三小？」的困惑。那篇被噓到XX的「跟男朋

友吃義大利麵」是連載小說，除了一開始的男友視角跟女友視角，後來竟然還出現義大利麵的視角。根據我鍵盤隔空診斷的鑑定，不管這個作者嗑了什麼，一定很純。 　　這個作者後來還寫了「我們不冥婚，好嗎？」以及「變成貓的24歲」，一樣是ㄎㄧㄤ爆，讓我懷疑說不定有濫用酒精的狀況。當時追文的我一再被逗笑，於是記下作者，就是寫了這本《牡丹》，叫作乃雄的傢伙。 　　身為一個低調內斂害羞避俗的人，我鮮少主動與人建立交情。但因為乃雄真的很有趣，所以除了PTT Marvel板的發文，我還開始關注臉書專頁順便留言刷存在感，後來彼此會聊上幾句。 　　雖然乃雄常寫ㄎㄧㄤ文寫到無法自拔，但其實是能正經好好說話的，除了關注時

事議題，對創作也很有想法，至少是有栽下去鑽研的那種人。 　　記得在某次深夜，同樣身陷趕稿深淵的我們在掙扎之餘，抓住喘氣的機會閒聊。聊著聊著不免想到目前卡關的稿子，便開始交換對創作的想法。 　　身為寫小說的人，對創作小說這件事難免抱持許多困惑。特別是坐在桌子前，一個人獨自與稿子奮鬥時，常會出現「這樣寫對嗎？」「這樣安排可以嗎？」「讀者對這部份的安排會喜歡嗎？」「這樣的情節會不會不夠有趣讓讀者失去興趣？」等等的想法，有一種拚命讓腦袋的馬達空轉，直到發出燒焦味的劇烈折磨感。 　　沒實際認真下筆過的人恐怕有些會以為，寫小說不過就是坐在電腦前配上一杯泡好的咖啡，對著鍵盤敲敲打打，小說就會像冷凍食品

微波後那樣叮一聲完成，然後就可以送到讀者面前隨意取用。（我也希望能是這樣輕鬆愉快的事。） 　　但敲打鍵盤輸入文字不過是最基本的表象。寫作時的腦袋總是高速運轉，思考著是否緊緊抓住了核心概念、主線支線的構思、主角配角的安排、節奏的掌握、對白的拿捏收放……這些都是在腦袋中運作無法被看見的。 　　在這之外，更多的是要面對自我懷疑並推翻之，一步一步踏穩掙扎前行。 　　這可以說是一種相當孤立無援的狀態。即使一時能尋求他人的建議與看法，但最終回歸到寫作時，作者本身是處於絕對的孤獨之中，要在那不見邊際的黑暗迷霧中獨自摸索，既沒有地圖也沒有指南針，沒有正確或錯誤。幸運的人可以看見遠方的燈塔有個遙遠的方向，

但更多的或許是僅僅憑著腳下隱約可見的踏足點，一點一點摸索，構築出故事的雛型，填入血肉和骨並來回反覆修整，直到文字與段落茁壯完整了全篇故事，直到完稿的解脫。 　　關於寫小說的事，我是這樣想的，乃雄大抵也同意。 　　幸運的是我們沒有被那份不斷糾纏、生長於呼吸之間的懷疑給擊垮，一直能持續創作。這部《牡丹》就是乃雄歷經各種短篇與連載的修煉後，所誕生的一部作品。 　　乃雄本身是攻讀日本文化的研究生，《牡丹》以她專攻的日治時代為背景，寫一段男女情愛與家族糾葛。讀著讀著，彷彿也跟著回到那時的台灣，其中所穿插的真實歷史事件，沒有讓角色之間的愛恨情仇變得渺小，反而更顯真實。讓人在讀著的時候發現，原來在男女

主角放閃的時候，歷史正發生這樣的事情。 　　儘管如此，《牡丹》並非歷史小說，乃雄另有其他安排。從PTT Marvel板發跡的她加入吸血鬼這個元素，讓這個距離現在有幾分遙遠的故事，多出幾絲奇幻色彩，看起來更是神秘，卻也容易想像。經過電影的洗禮，吸血鬼的諸般形象早已經深植在人的腦海中，乃雄順勢操作，不玩驚天動地的翻轉，只是在鬼的形體之外多加幾分人味。吸血鬼或許是冰冷的，但情感的溫度不分物種。 　　至於書中所描寫的女性的無奈，無論時代更迭，似乎是自古皆然。嫁雞隨雞嫁狗隨狗這樣一句人人聽過的成語，戲謔地道出女性的弱勢處境。身為女性，乃雄更是切身體會那些不公平，是那樣血淋淋且真實，使她能精準從女性的

視角出發，去描繪主角牡丹的遭遇。 　　──嫁給鬼的新娘。 　　倒楣的牡丹有個嗜賭成性的不成材父親，欠下太多賭債，所以賣了牡丹還債。這是耳熟能詳的故事，女性被視作物品買賣或作為抵押。乃雄大概也是注意到了這點，才故意作此安排，去強調女性的悲哀無助。 　　這看上去其實很毛骨悚然。先不論為了償還賭債賣身，牡丹無法選擇夫家這件事相當荒謬，婚姻不是像手遊刷首抽可以輕鬆重來的事。偏偏那時候，不，甚至直到現在都已經西元二○二○年了，一定還有女人無法為自己作主，要被迫任憑擺布吧。 　　幸好乃雄給了不算差的安排。小說畢竟還是小說，無法比現實更荒謬。 　　至於主線中的復仇之路，再一次演繹了人始終比鬼可怕的

這個道理。人的形貌有千百萬種，有賭博成癮六親不認的人、有被利益蒙蔽雙眼而設局的人、有沉迷修道卻幾乎入魔的人、有探究真理而遭其反噬的人、也有苟且偷安不願意面對現實的人……這些人混雜而成的眾生相，看起來與群魔亂舞無異，在故事中放肆交織、糾纏作弄，至死方休。 　　可惜在巨大的時代之輪底下，人都要像無力的螻蟻被輾壓，融進胎紋成為歷史的一部分。或許被銘記，或許無人知曉。我喜歡《牡丹》的結尾，礙於洩漏劇情走向無法說破，只好先說，讀了有股詩意般的飄渺。 　　另一個令我相當喜愛的部份則在故事的末段，那些精心構築的文句讀起來都像歌，乃雄以一種歌般的方式去敘述，像有人在櫻花飄落的池邊低聲吟唱。這是既寫小說也寫

歌的乃雄獨有的風格。 　　一路看著乃雄的作品，她持續在改變在精進，越來越顯現出專屬於她的文體。不過我想，我們還是要持續為了創作而困擾不已吧。這是身為作家既痛苦卻又幸福的煩惱。 　　差點忘記了，還有一些出於我個人主觀的小碎念，《牡丹》既然有吸血鬼又有男女情愛，或許會讓人想到暮光之城，但實際上是不同性質的故事。因為這個故事沒有備胎狼人、女主角也不是面癱、更沒有令人尷尬癌末期就地暴斃的親友打棒球橋段。對此感到恐懼的讀者大可以放心閱讀。 　　更重要的是男主角有固定洗頭的習慣，真是謝天謝地。 　　說到這邊已經有點長了，不耽誤你享受閱讀的時光了。淨空你的腦袋，放輕鬆呼吸，進入一九三八年的台灣吧。

  ◎崑崙 牡丹躲在路邊的招牌後看著被警察大人抓進派出所的阿爸。 那天的天空湛藍，悠閒的雲朵輕柔地停在空中，一九三八年的台灣在日本總督府統治下，進行著一連串的現代化改革，但在平民生活的街庄仍舊瀰漫一派傳統悠閒的氣氛，陽光照進紅磚造的騎樓，樹影扶疏的樹下立著小小的土地公廟。帶著軟帽的老人坐在巷子的板凳聊天，一位老婦在街邊的矮樓梯上喝著街邊小販賣的楊桃汁，小販的旗幟在微風之下輕輕飄揚，但牡丹沒空感受這一派悠閒的氣氛，她耳邊的鬢髮與翡翠耳環隨著微風的吹拂飄逸著。一心想著阿爸要是被抓進派出所拘留個二十九天，全家就準備餓死了。 正當她絞盡腦汁思考著要如何救出阿爸時，忽然一個撐著黑傘，一身著白襯

衫西裝褲，清秀臉旁毫無血色的男子蹲在她旁邊。男子穿著有些寬大的衣服，微風吹著稍嫌寬鬆的長衫不斷擺動。 「姑娘，有什麼煩惱嗎？」男子微笑歪著頭問牡丹。 不知道何時出現的男子讓牡丹嚇了一大跳，但牡丹隨即鎮定地繼續往派出所的方向看去。 「請問如何稱呼？」牡丹盯著派出所的方向，隨口問著。 「春生。」男子格外蒼白的臉笑著，感覺有點邪，眼角皺在一起，牡丹觀察到他眼頭有顆小小的痣，「看來姑娘是想救剛剛被抓進去那位大哥吧。」 牡丹沒有理會他，她聽阿嬤說過大白天撐傘的男人都不可靠。甚至有可能是鬼，這個街庄至今還流傳著後山林少爺的傳說，說早已變成活死人的林少爺不時都會拿著傘出沒。不過牡丹倒覺得這是騙小孩子的傳說，

只是如今看見這名拿著黑傘的男子，又再度想起了這個傳說。 她瞥了那撐傘的男人一眼，沒回應他的猜測，決定先回家晚上再想辦法看能不能用酒賄絡貪杯的田中大人。 「姑娘，還沒問妳芳名。」撐傘的男人遠遠的叫喚著牡丹。 牡丹腦子一團混亂，心煩意亂頭也不回地走掉。 ＊ 牡丹是張家的長女，本來她該叫做招弟或是罔市，但在祖母的堅持之下，取了個這麼豔麗的名字，雖然總有人揶揄牡丹像是遊女的花名，也有人只有下女會以花為名，剛開始街坊總是閒來無聊碎嘴個幾句，但看著牡丹一天天成長後，經歷過喪母而長成獨立堅強的個性，鄰居們多是心疼，也再沒人會拿她的名字開玩笑。 牡丹回到斑駁破舊的家裡，看見祖母默默坐在門口板凳流淚就知道有人回

來報信過父親又被抓進警局了。

探討不同發酵策略對於Klebsiella sp. Ana-WS5生產1，3-丙二醇與2，3-丁二醇之影響

為了解決工科 系 PTT的問題，作者李芳慈 這樣論述：

探討不同發酵策略對於Klebsiella sp. Ana-WS5生產1，3-丙二醇與2，3-丁二醇之影響研究生：李芳慈指導老師：顏宏偉摘要--本研究為探討利用不同碳源培養Klebsiella sp. Ana-WS5以同時生產2，3-丁二醇（BDO）和1，3-丙二醇（PDO），並嘗試利用不同發酵控制增加BDO與PDO之生產濃度。根據搖瓶批次實驗的結果發現，以甘油 (70 g/L)為單一碳源生產BDO (21.7 g/L)與PDO (10.3 g/L)的效果較佳；以粗甘油 (70 g/L)為單一碳源時，會使菌體濃度下降 (2.2 g/L)，但其培養基經發酵後pH均能維持高於5.0，有助於PDO合

成 (14.9 g/L)；而以相同濃度的混合碳源 (甘油與葡萄糖，濃度分別為50 g/L、20 g/L)反而會導致BDO (5.9 g/L)與PDO (2.1 g/L)產物濃度下降；先前的文獻指出，培養基中添加醋酸有助於BDO的生產；本實驗研究結果發現添加乳酸具有類似醋酸添加的效果，亦可以提升同時生產的BDO與PDO，並且添加10 g/L的乳酸能有效地提升30 %的Total Diols產量 (30.8 g/L至39.4 g/L)。包埋法固定化細胞培養，凝膠球粒徑較小 (1.3 mm)有助產物的生產；不同凝膠球顆粒數因為pH過低的影響，無明顯的差別；重複批次實驗可以有效的重複三次，BDO和PD

O均能維持約20 g/L、11 g/L；連續式放大培養BDO、PDO生產速率分別是0.27 g/Lh、0.20 g/Lh，產率分別為0.29 g/g、0.54 g/g。細胞固定化對產物的生產沒有特別的提升效果，但有利進行重複批次實驗。不同溶氧量對菌體生長及BDO與PDO生產也有不同影響，高溶氧批次發酵，有助於菌體生長 (2.8 g/L)、提高BDO的濃度 (30.1 g/L)、生產速率 (0.42 g/Lh)、產率 (0.43 g/g)；低溶氧批次發酵反而有利於PDO的生產，提升PDO濃度 (17.2 g/L)、生產速率 (0.13 g/Lh)、產率 (0.59 g/g)。固定pH 7.0的策

略，能單獨提升PDO的最大濃度 (25.0 g/L)、生產速率 (0.33 g/Lh)約為控制組 (無pH調整)兩倍之多；雖然在探討固定時間間距調整pH (12 hr、24 hr)之批次策略無法有效提升BDO及PDO之最大濃度，但相對於控制組生產速率方面卻有大幅度的增加，BDO (0.21 g/Lh)、PDO (0.42 g/Lh)；固定時間間距調整pH (24 hr)之間隔式饋料批次策略皆在Total Diols的最大濃度 (74.3 g/L)、反應速率 (0.83 g/Lh)有相當的提升，連續式饋料能改善間隔式饋料產物延遲生產的問題，但對產物的生產沒有明顯的影響。氣舉式發酵槽具有較好的溶氧

速率且無機械攪拌葉片之剪切力的產生，相對於攪拌式發酵槽，有利於菌體的生長 (3.0 g/L)與BDO (22.2 g/L)的生產。總結，本次研究結果顯示，以Klebsiella sp. Ana-WS5 生產BDO和PDO對於發酵液中溶氧量、pH的變化、發酵槽型式是相當敏感的，細胞固定化培養則有利於重複批次實驗。此外，乳酸添加、溶氧的改變、固定時間間隔調整pH之饋料批次實驗皆是簡單又有效的方式作為提高BDO和PDO生產的發酵策略。關鍵字：2，3-丁二醇、1，3-丙二醇、乳酸、pH、溶氧量一、緒論1-1 前言當今石化能源涵蓋了生活中的食衣住行，石化能源與現代人類生活已密不可分。人口的急速增加、工業

科技的快速發展導致對石化能源的需求量高度成長。國際能源情勢方面，於二十一世紀中石油、天然氣、煤炭等石化燃料即將枯竭，但人類的需求量仍然持續增加，因此價格也不斷攀升。而高度依賴石化能源，對地球環境也帶來極大影響，例如溫室效應、全球暖化、海平面上升等，因此開發替代再生能源將成為全球關注的議題之一。全球石化燃料的日益短缺、價格飆漲，受限於此天然資源的問題，非石化原料來源的綠色化學品，將是未來重要的化學品來源。因此利用微生物發酵法生產化學品已逐漸引起關注。1-2 研究動機本研究所使用的菌株Klebsiella sp. Ana-WS5為能同時生產2，3-丁二醇（BDO）和1，3-丙二醇（PDO），故利用

不同的碳源與不同的發酵策略對於產物BDO與PDO的分布進行一連串的研究，所使用的發酵策略有(1)溶氧、(2)固定pH、(3)固定時間間距調整pH。另外，文獻指出於培養基中添加醋酸、乙醇能有效提升產物產量，本研究則為添加亦為副產物的乳酸，以觀察其對產物的影響。為了有效地重複使用微生物細胞，利用載體為海藻酸鈉之包埋法進行細胞固定化，並探討不同固定化條件對於產物生產的影響。二、文獻回顧2-1 BDO介紹BDO的開發起始於1906年，由Harden和Walpole首次利用微生物轉換法以Klebsiella pneumonia生產 (Harden and Walpole, 1906)。如今石化燃料的短

缺，石油價格不斷的上升，以微生物發酵法生產BDO再次受到重視。BDO，C4H10O2，分子量90.12，無色結晶固體或黏稠液體，溶點23~27 ℃，沸點179~182 ℃，密度為1.05 g/cm3，燃燒值為27198 J/g，能溶於水、醇和醚類。BDO應用相當廣泛，應用範圍有燃料、化工、食品、燃料、醫學、交通等多種領域中。例如BDO具有高燃燒值，是一種極具價值的液體燃料可以作為航空燃料；具有較低凝固點的特性可用作抗凍劑。另外，也可以應用於化妝品、香水、藥物載體、染料、印刷油墨、炸藥等 (Garg and Jain, 1995；Syu, 2001)。目前的生產BDO主要分為兩種方法，一是化學合

成法，但化學合成法有其缺點為必須在高溫高壓高單價觸媒的環境下進行合成，成本較高，又因BDO結較為複雜，相對的困難度也會提升。而用微生物發酵法來生產BDO，其優點為操作會比較簡單，且可以利用工業廢料當成營養源，成本也會降低，亦符合現在所提倡的綠色化工，所以微生物發酵法是現在生產BDO較受歡迎的方法 (Wong et al., 2012)。2-2 PDO介紹 PDO是已知最古老的發酵產物之一，它早在1881年由August Freund以Clostridium pasteurianum加入含有甘油的混合培養基發酵生產而得的中間體化合物，一種可直接利用微生物轉化合成之非石化來源之綠色化學品 (B

iebl et al., 1998；Reimann et al., 1998)。PDO，分子式C3H8O2，分子量76.09 ，無色或淡黃色的黏稠液體，略有刺激的味道，溶點-32 ℃，沸點214 ℃，密度為1.053 g/cm3，與水、乙醇、丙酮等多種溶劑互溶。PDO具有良好生物降解性，且不具毒性，是一種重要化工和醫藥中間體原料，可廣泛應用於多種不同產業領域，如高分子、化妝品、食品與醫藥等產業。同時PDO，更是合成新型聚酯—聚對苯二甲酸丙二酯（PTT）的主要單體之一，如圖2-3，PTT具有許多獨特的性質，因此受到國際的廣泛重視 (Biebl et al., 1999；Kurian, 2005)

。生產PDO目前有兩種方法，分別為化學合成法和微生物發酵法。化學合成法，缺點是副產物多、選擇性差、操作條件需高溫高壓、所利用的化學原料均為不可再生的石油或煤碳資源；而微生物發酵法，選擇性高、操作條件溫和、原料可用再生的農產品或工業廢料粗甘油等符合可持續發展的需求，所以越來越受重視。2-3 BDO與PDO代謝路徑圖一為微生物發酵的代謝路徑圖。由圖可發現以甘油為碳源時，代謝產物包含PDO、BDO、乙醇、醋酸、乳酸、琥珀酸，其中PDO通常是甘油發酵的主要產物。研究指出，利用Klebsiella sp.進行甘油發酵的期間，隨著pH減少醋酸的形成會被BDO形成所取代，使得BDO也成為較為主要的產物之一

。圖2-1 產物代謝路徑圖2-4 細胞固定化介紹微生物固定化技術使利用物理或化學程序將微生物定位於特定空間區域中，並使其保持活性，可維持較高的菌體濃度及加快生產速度 (Idris et al., 2006)。具有反應速度快、不易受汙染、產物分離容易、穩定性高、可重複利用等優點。依照固定載體和作用方式不同可分為五種類型:吸附法、交聯法、包埋法、包覆法、共價鍵結法。微生物最常用的方法為包埋法，是將微生物置於天然高分子多醣類或高分子凝膠中，使微生物固定化。其優點有成型方便、對細胞活性影響小、可以製作成各種形狀等 (Sun, 1998)。載體材料的選擇對微生物固定化發酵也是非常重要的因素，理想的固定

化載體應該為穩定性高、對微生物無毒性、質傳性能良好、不易被微生物分解、機械強度高、使用壽命長、價格低廉等。目前，微生物發酵最常使用的固定化包埋法使用的載體材料有瓊脂、海藻酸鈉、聚乙烯醇、聚丙烯醯氨、聚乙烯乙二醇、具丙烯酸等凝膠。其中，海藻酸鈉是由褐藻提取的多醣，故其價格低廉、生物相容性良好且固化、成型方便，是目前使用最廣、研究最多的固定化載體。2-5 影響BDO、PDO產量因素(1) 溶氧量發酵液中的溶氧濃度對微生物的生長和產物BDO、PDO的形成有著重要的影響。在發酵過程中，菌體必須要有適當的無菌空氣才能繁殖和累積代謝物，不同菌種生長、不同代謝路徑所需要的溶氧量都是不相同的，所以研究反應

器內溶氧量對發酵的影響及對代謝產物生產效率、產量是非常重要(Zhang et al., 2007)。Klebsieblla sp.為兼性厭氧菌，由上述可知在好氧和厭氧條件下分別利用兩種不同的途徑代謝甘油能分別得到其主要的代謝產物，在好氧的條件下，甘油代謝由3-磷酸甘油操縱子 (glp)調控；甘油在依賴ATP的甘油激酶催化下磷酸化，生成3-磷酸甘油，3-磷酸甘油在甘油脫氫酶作用下轉化為磷酸二羟丙酮進入酵解途徑，進而生成BDO；在厭氧條件下，甘油的代謝主要由二羟丙酮 (dha)調控，分別為氧化和還原兩條途徑，在氧化途徑，甘油在依賴NAD+的脫氫酶的催化下脫氫轉變為二羟丙酮，二羟丙酮在二羟丙酮激酶的

作用下磷酸化為磷酸二羟丙酮，進而進入酵解途徑生成BDO、乳酸、甲酸、乙醇等代謝副產物。在還原路徑中甘油則是以在甘油脫水酶的作用下轉變為甘油3-羥基丙醛，然後利用氧化還原途徑生產的NADH，在依賴於NADH的1,3¬-PDO-NAD氧化還原酶的作用下生成PDO。GDHt是催化甘油轉化生成PDO代谢途徑中的關键限速酶，因此，後續將可以使用GDHt之酶活性監測不同發酵策略對PDO合成的影響(Wong et al., 2011)。(2) pH發酵液的pH值對BDO、PDO生成途徑的影響作用是非常大的。這是因為BDO生產是一個多副產物的途徑，每種副產物生成途徑的相關酵素最適合的pH並不一致，因此發酵過

成中pH不僅會影響細菌的生長還會影響細菌的代謝過程。微生物以甘油為碳源發酵生產PDO的過程中，經由pH的控制策略可以有效的增加甘油的轉化率和控制副產物生產。目前PDO的發酵生產主要都採用間歇性的發酵過程，隨著甘油濃度的降低及產物PDO的累積，使菌體的生長速度逐漸緩慢，產生嚴重的產物抑制效應 (Ji et al.,2007)。所以可以利用發酵過程中pH的波動加上分批饋料的方式，因為發酵過程中當PDO逐漸增加時，菌體生長的環境也隨著改變，以至於菌體的生長速率下降，使副產物的產量隨之增加，所以將pH維持於中性可以維持菌體的生長速率，也可以降低副產物的大量產生。所以運用此策略可以提高PDO的最終濃度、

提高甘油的轉化率、抑制副產物的生產。無控制pH值的發酵過程中24小時內的pH值自然地快速下降至低點，此過程pH值差約3.5~4.0，此pH的快速下降是由於BDO和酸類的生成。強迫pH值的波動之方法是利用固定時間間距調整pH值，然而發酵液會自發性的降回低點，使發酵過程中能模仿自然發酵中的pH值變化，pH值能於明確的時間間距中不斷震盪。此新方法可以有效的提升BDO和PDO的生產及增加甘油的利用率(Petrov et al., 2010)。本實驗將於固定時間間距 (12 hr、24 hr)將pH值調整至7.0以觀察BDO和PDO之生產變化。(3) 添加醋酸、乙醇的影響文獻曾提出在發酵液中添加醋酸、

乙醇可以有效的提升甘油的利用率和BDO產量的提升，由圖2-1的甘油代謝路徑圖可以發現甘油經由甘油脫氫酶催化作用後可以代謝出BDO、琥珀酸、乳酸、醋酸、乙醇等代謝產物，因此在發酵液中各別添加副產物少量醋酸、乙醇，發現能在甘油代謝過程中產生產物抑制效應，使碳流減少利用於生產此兩種副產物，進而有效利用於BDO的生產 (Zeng e tal., 1990)。本次實驗也是利用此原理，在發酵液中添加亦為副產物的乳酸並測試添加不同濃度的乳酸對BDO與PDO生產的影響。三、材料與方法3-1 實驗材料3-1-1 實驗菌種本實驗所採用的菌株Klebsiella sp. Ana-WS5，具有發酵生產二醇類的能力，

由國立成功大學化工系張嘉修教授所提供。此菌株篩選於國立成功大學實驗所高效率生物消化系統中的污泥，經利用16S rRNA基因序列(圖3.1)與Genbank鑑定後確定菌株種類為Klebsiebllasp.，並命名為Klebsieblla sp. Ana-WS5。圖3-1 Klebsiella sp. Ana-WS53-2 實驗架構圖3-2 實驗架構Ⅰ (懸浮培養)圖3-3 實驗架構Ⅱ (固定化培養)四、結果與討論4-1 搖瓶批次發酵程序（Flask Experiments）4-1-1 不同碳源之影響此實驗為探討不同碳源對於菌體生長及BDO與PDO產量之影響。由圖4-1得知，菌體濃度以甘油為碳源時

最高，約2.3 g/L。BDO以葡萄糖為碳源時產量最高，PDO、Total Diols以甘油為碳源時最高，由於甘油能同時生產BDO與PDO，而葡萄糖主要為生產BDO。以甘油當作碳源，能得到較高的菌體濃度且由代謝路徑可知利用不同發酵策略能分別生產較高BDO與PDO。且由於現今生質柴油產量日益增加，其副產物粗甘油也大量的生產，未來以粗甘油為替代碳源將可以降低生產成本。因此，選定甘油當作後續培養所使用的碳源。圖4-1 不同碳源對菌體生長及產物產量之影響4-1-2 添加不同乳酸濃度之影響文獻指出，當以Klebsiellasp.生產BDO時，若在培養基中添加少許的代謝副產物醋酸或乙醇，會使BDO的產量有

所提升。所以本次實驗為探討添加亦是代謝副產物的乳酸在不同濃度下對菌體生長及BDO與PDO產量之影響。由圖4-2可知，效果以添加10 g/L為最好，較控制組高出30%，其BDO、PDO、Total Diols分別為26.3 g/L、10.8 g/L、37.1 g/L。此結果由圖2-1甘油代謝路徑推測當培養基中添加乳酸，由於產物濃度效應而使甘油代謝路徑向BDO，故提高BDO的產量。圖4-2 添加不同濃度的乳酸對菌體生長及BDO與PDO產量之影響4-1-3 細胞固定化之重複批次實驗本次實驗探討以海藻酸鈉為固定化載體的固定化細胞進行Repeated-Batch實驗對BDO與PDO產量之影響，每一次批次

以96小時為一個循環。由圖4-3所示，固定化細胞在第一批次到第三批次發酵實驗中，雖然主要代謝產物的產量有略微的下降，但BDO和PDO的產量分別都可以維持在20 g/L、11 g/L左右。但在第四批次實驗，凝膠球會開始破裂使菌體流出凝膠球外，推測凝膠球破裂後浸泡於培養基中，造成培養基的改變加上菌體的活性降低，導致主要代謝產物的產量下降。圖4-3 細胞固定化之重複批次實驗對BDO與PDO產量之影響4-2 5-L攪拌式發酵槽批次程序 (Batch)4-2-1 控制溶氧量之影響溶氧量高低會影響菌體的生長與甘油代謝路徑，本次實驗控制溶氧量於高DO值(70 ± 10%)與低DO值(10 ± 10%)之批

次發酵策略，來探討不同的溶氧發酵策略對菌體生長及BDO與PDO產量之影響。由圖4-4所示，在高溶氧策略下，細胞能快速生長並得到較高的菌體濃度2.7 g/L而低溶氧時的菌體濃度僅達1.7 g/L且在主要代謝產物BDO方面，高溶氧發酵和控制組的最大濃度幾乎相同約30.3 g/L，但其BDO的生產速率為0.42 g/Lh遠大於控制組的0.16 g/Lh，約2.6倍之多；於PDO方面，反而於低溶氧的狀態下是較有利於Klebsiella sp.生產PDO，因為其PDO生產速率可達0.27g/Lh是控制組0.12 g/Lh的兩倍左右。由表4-29可發現，由高低溶氧的發酵策略可以使同時生產PDO和BDO的K

lebsiella sp.對生產其中的某一產物選擇性較大，提高其中一個產物的生產量同時降低另一個代謝產物的生產，更有助於後續分離純化的步驟。圖4-4 控制溶氧量之比較4-2-2 固定pH值之影響文獻指出pH值控制於6.0~7.0是較適合Klebsiella sp.生長(Jiet al., 2011)。因此本次實驗分別將pH值控制於6.0、7.0，探討不同的pH值發酵策略對於菌體生長及BDO與PDO產量之影響，由圖4-5可發現，將pH固定於6.0、7.0時，菌體濃度最高為pH固定於7.0。固定pH會使PDO的產量和生產速率明顯的提升。當發酵過程中pH均固定於7.0時，PDO的最大濃度與生產速率能

提升至25.0 g/L、0.33g/Lh；但在BDO方面固定pH值之發酵策略無法對產量或生產速率有所幫助。雖然此方法不利於BDO的生產，但對於菌體生長和PDO生產方面卻是有不錯的進展。圖4-5 固定pH之比較4-2-3 固定時間間距調整pH之批次發酵實驗本次實驗將仿效控制組pH自然快速下降的變化來測試產物產量和生產速率的影響。培養並利用5N NaOH在固定時間間距分別為12小時和24小時調整槽內發酵液的pH值，調整為7.0，直到pH不再下降至7.0以下。由圖4-6可以發現，當pH被調整為7.0之後12小時之內即又下降，所以此方法可以有效地強迫pH產生震盪變化。實驗結果如圖4-28所示，此強迫p

H來回震盪的方法確實可以提升BDO的生產速率，但依舊無法提高BDO的產量，推測是因為碳源甘油快速地被消耗，以至於產量無法繼續提升；PDO方面，此方法跟固定pH值一樣有利於PDO的生產，甚至效果更好。比較兩種不同時間間距所得到的數據，在主要代謝產物方面，以24小時調整一次的效果比12小時調整一次較佳，因為pH值12小時內掉回5.0以下，在pH維持 5.0以下的時間會長達12小時，此環境是有利於BDO的生長，所以BDO的產量會較好。因此pH的強迫震盪是可以有效刺激BDO、PDO，提升生產速率，而不同的pH環境，更可以提升各別的產量。圖4-6 固定時間間距調整pH之比較4-3 5-L攪拌式發酵槽饋

料批次程序 (Fed-batch)4-3-1 固定時間間距調整pH之饋料批次發酵實驗由4-2-3批次實驗得到每24小時調整pH至7.0可有效的提升BDO、PDO的生產速率，但因為碳源在96小時內快速消耗，以致無法持續提升BDO的產量。因此本實驗以每24小時調整pH值之間隔式饋料批次發酵策略來改善主要代謝產物產量不佳的問題。但間隔式饋料是具有產物延遲累積的問題，並用連續式饋料作為改善。由圖4-30可會發現連續式饋料確實可改善產物延遲累積的問題，且饋料批次也能以提升主要代謝產物產量，BDO的最大濃度由14.3 g/L 增加至20 g/L，PDO也更從30.1 g/L提升至54.8 g/L。。圖4-

7 饋料批次之比較五、結論由搖瓶實驗可知，甘油可以提高菌體濃度且得到較好的Total Diols。在培養基中添加乳酸能有效提升Total Diols約30 %。而包埋法之固定化細胞重複批次實驗可以重複四次批次實驗，前三次批次BDO和PDO都可以維持在20 g/L、11 g/L；第四次批次凝膠球則會破裂。細胞固定化對產物的生產沒有提升效果但有利進行微生物細胞重複利用。5-L攪拌式發酵槽批次發酵之溶氧實驗中，高溶氧，可以獲得細胞較高的菌數量2.8 g/L、提高BDO的最大濃度30.1 g/L、生產速率0.42 g/Lh、產率0.43 g/g；低溶氧批次發酵反而有利於PDO的生產，最大濃度17.2

g/L、生產速率0.13 g/Lh、產率0.59 g/g；固定pH實驗，以pH值控制於7.0時可得較高的菌體濃度2.8 g/L、PDO的產量和生產速率明顯的提升至25.0 g/L、0.33g/Lh；固定時間間距調整pH至7.0實驗，以每24小時調整pH值至7.0相對於固定pH 7.0可有效提升BDO的生產速率(由0.13提升至0.20 g/Lh)，此方法跟固定pH值一樣有利於PDO的生產，甚至效果更好。5-L攪拌式發酵槽饋料批次發酵之固定時間間距調整pH至7.0實驗，強迫性的pH震盪有助菌體的活性，發酵液中pH的改變也可以改變甘油的代謝路徑進而提高BDO、PDO生長速率 (0.20 g/Lh、

0.42 g/Lh)，之後再利用饋料的方式，來促進BDO、PDO (20.0 g/L、54.8 g/L)產量；而兩種不同的饋料方式，差別僅於連續式饋料批次可以改善間隔式饋料批次時產物延遲生產的問題，對產物的產量並無明顯影響。參考文獻Biebl H., Zeng A.P., Menzel K., Deckwer W.D., (1998). Fermentation of glycerol to 1,3-propanediol and 2,3-butanediol byKlebsiella pneumonia. ApplMicrobiolBiotechnol, 50:24-29.Biebl H.,

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