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LRWD1在人類睪丸細胞及精蟲的表現及調控

為了解決鎖 頭 WD40的問題，作者柳秀盈 這樣論述：

LRWD1（Leucine-Rich repeats and WD repeat domain containing 1）基因位於人類染色體7q22.1，整個基因體含有15個外子（exons）。LRWD1蛋白在蛋白質N端區域有一個白胺酸多重複序列（Leucine-Rich repeats, LRR），在蛋白質C端區域則含有三個色胺酸-天門冬胺酸（trypotophan-aspartic acid, WD40）的motifs。LRWD1表現於頭頸交接位置(centrosome)，在生殖方面，當中心體出現問題，可能影響精蟲的活動力，使得無法授精，進而引起生殖障礙。因此本研究分成4部分探討LRWD

1在人類睪丸細胞及精蟲的表現及調控，第一部份以免疫螢光分析在精子型態缺陷LRWD1表現及精蟲活動力的相關性，依據WHO及Kruger分類標準我們將其分為三類asthenozoospermia、teratozoospermia、athenoteratozoospermia，利用t-test統計結果顯示在頸部、尾部、未成熟精子異常的精蟲中LRWD1的表現相對於外型正常的精蟲比例偏低，推測LRWD1表現可能與精蟲型態異常有關聯。第二部分以流式細胞儀分析加入cycloheximide處理不同時間的LRWD1wild及LRWD1ΔLRR螢光表現量，結果顯示LRWD1ΔLRR螢光表現量顯著減少，推測缺失L

RR domain會造成LRWD1蛋白不穩定或表現偏低。在剔除LRWD1 domain則可觀察到在細胞週期會arrest在G2/M phase，影響細胞分裂的進行。第三部分以knock down技術分析LRWD1在生殖細胞中的功能，結果顯示將siRNA1353以電穿孔950V轉染細胞後培養24小時knock down效果最佳，利用knock down實驗分析LRWD1表現結果顯示會影響α-及β-tubulin polymerization的進行。第四部分探討NF-κB轉錄調控因子對於LRWD1啟動子（promoter）的調控，以CHIP分析及確認NF-κB會結合在LRWD1啟動子，未來將進一步

確認NF-κB對於LRWD1的轉錄及基因表現調控的功能與角色。藉由本研究的完成，能對於LRWD1在人類睪丸細胞及精蟲的表現及調控有深入瞭解。