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Pantoea stewartii中pSW200 維持穩定性的機制

為了解決離心單位xg的問題，作者巫盈忠 這樣論述：

Pantoea stewartii SW2 含有13個質體，而 pSW200 是其中之ㄧ，並且在 pSW200 與 ColE1 的複製起始區域具有高度相似性，因此屬於 ColE1 類質體。質體穩定性結果發現 pSW200 可以在 Escherichia coli HB101中穩定存在，並估計質體數為13。本研究發現 pSW200 的 RNAII 啟動子 -35 上游之9個鹼基對，5’-AAGATCTTC，具 UP element 遠端次單位功能。融合轉錄質體和試管體外 RNAII 合成實驗，結果顯示當9個鹼基對同時刪除後造成 RNAII 啟動子轉錄活性降低78%與 RNAII 合成量也大幅降

低。相同的突變造成 pSW200 的突變株之質體數由13降低至5，質體穩定性也大幅降低。發現在 ColE1 也包含相似的序列，5’-AGGATCTTC，將 pYCW301 也發生同樣的突變，則 pYCW301M 的平均質體數由34下降至16。若將 5’-AAGATCTTC 插入 pYCW302，則可使得質體數由12增加至28。另外，pSW142KW 是 pSW100 的衍生質體，是一個不穩定的質體，但是嵌入 5’-AAGATCTTC 則可增加質體穩定性與質體數，顯示此序列對於維持質體穩定性非常的重要。總結 RNA polymerase 的 α 次單位結合於 RNAII 啟動子 -35 上游的

9個鹼基對序列，對 ColE1 類質體的 RNAII 合成之效率與質體穩定性的維持有其必要性。ColE1 的 RNAII 啟動子包含三個可被甲基化的 5’-GATC 序列，而其中的 -43 和 -32 也可以在 pSW200 中發現。從融合轉錄質體的研究發現將 -43 的序列置換成 5’-AATC，並不會影響 RNAII 啟動子的活性與質體的穩定性，這樣的結果顯示 -43 位置可甲基化的 5’-GATC 對 RNAII 的合成可能並不重要。