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培養口腔黏膜上皮細胞移植後人類角膜之表現型探討

為了解決1028 twilight的問題，作者陳宏吉 這樣論述：

幹細胞生物學的新近發展，已經促成細胞治療的創新應用。僅次於造血幹細胞，上皮幹細胞乃是廣為研究的對象之一。眼角膜上皮的主要來源，咸認為出自於存在輪部區域的一群幹細胞，其能生成短暫擴增細胞。幹細胞不僅可以確保角膜上皮進行自我更新，同時也負責角膜上皮組織的修復與再生。很遺憾地，在使用成體幹細胞一事，仍然存有限制。首先，對於一般成體幹細胞或者是特別針對角膜幹細胞的辨識，目前並無最好的標記。其次，操控幹細胞的體外培養系統仍未完善建立。最後，體外培養後的上皮細胞層片移植回人體後的安全性、有效性、及其表現型尚不清楚。 不論何種原因的輪部幹細胞缺乏均會引發角膜上皮化不良、持續上皮缺損、角膜

血管化、角膜結痂（即角膜結膜化），進而導致視力減退、眼球不適與疼痛，以及眼表層不穩定。過去二十年來，此類眼表層疾病的治療已有相當程度的進步。體外培養角膜上皮幹細胞移植，即傳統輪部移植的進階形態，如今被視為外科術式的首選之一。雖然原型術式在本質上為自體形式，值得注意的是，針對雙側完全輪部缺乏者，若未使用免疫抑制劑，異體培養角膜上皮細胞極易遭到排斥。另一方面，仍無完整可靠的證據指出，經移植之細胞（即幹細胞）可以長期存活。近來，日本團隊發展出自體「培養口腔黏膜上皮細胞移植」，並被視為創新的細胞治療方式。然而，比之角膜上皮細胞，口腔黏膜上皮細胞的抗新生血管效應及上皮屏障功能較為低下，以至於其上皮透光性

和規律性相形見絀；如此將有礙口腔黏膜移植以後之視力發展，也成為此項技術之主要劣勢。 本研究的第一部份為「培養口腔黏膜上皮細胞移植」之第一期臨床試驗。自2006年四月起, 分別在急性（n = 6）與慢性（n = 7）期角膜灼傷進行「培養口腔黏膜上皮細胞移植」。結果顯示出「培養口腔黏膜上皮細胞移植」的臨床潛力，在急性期可促進上皮化與減少發炎，在慢性期可重建結膜與角膜表面，在經過後續眼表層重建手術後還可改善視力。由於免於排斥且可重複操作，「培養口腔黏膜上皮細胞移植」可視為處理嚴重角膜灼傷的替代治療或中繼療法。 本研究的第二部份採用傳統組織病理學與免疫螢光共軛顯微鏡，在「培養口腔黏膜上

皮細胞移植」後的角膜以及為進行「培養口腔黏膜上皮細胞移植」的口腔黏膜與口腔黏膜上皮細胞探究分化-相關與推定幹細胞標記。「培養口腔黏膜上皮細胞移植」後10至22個月之間，從全層角膜移植（n = 1）與結膜輪部自體移植（n = 3）等手術獲得角膜組織。結果驗證正常簡單上皮表現的第八型角質蛋白在正常角膜及結膜上皮均有表現，但除非癌化，在正常口腔黏膜上皮細胞並不表現。重要的是，位於基底上皮小而緻密的p75-陽性細胞很可能包含有幹細胞，意味著口腔黏膜上皮細胞移植到角膜後可以長期存活。 本研究的第二部份運用類似流程，在另外六位病人「培養口腔黏膜上皮細胞移植」後的角膜上探究血管生成相關因子。「培養口

腔黏膜上皮細胞移植」後9至26個月之間，從全層角膜移植（n = 3）與結膜輪部自體移植（n = 3）等手術獲得角膜組織。結果支持臨床推論：口腔黏膜上皮細胞僅具少量或缺乏抗血管生成活性，導致「培養口腔黏膜上皮細胞移植」術後角膜新生血管的現象。特別的是，「培養口腔黏膜上皮細胞移植」術後角膜內移植過來的口腔黏膜上皮細胞呈現異質化血管生成活性，在其中第一型可溶性血管內皮生長因子受體、第三型金屬蛋白酶組織抑制因子、與第一型凝血酶敏感蛋白可能扮演樞紐角色。 藉由前述臨床試驗的表現型分析，培養上皮移植臨床使用的理論基礎得以驗證，並得以據此進而改良此創新手術之臨床實用性。