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探討鮑魚菇轉形株菌絲體、子實體與擔孢子之異源基因表現

為了解決CBR250RR的問題，作者黃莉欣 這樣論述：

菇類分子農場係以菇類為生物反應器，生產醫藥用蛋白質或工業用酵素，具備安全性高、操作簡單及成本低廉等優勢，為近年來新興之生物技術應用。過去研究藉由農桿菌媒介轉形法成功進行多種菇類轉形，亦發展不同分生策略提升異源蛋白質表現量。前人發現可表現綠色螢光蛋白質之金針菇轉形株，其綠色螢光有聚集於蕈褶之現象，推測異源基因可能集中於蕈褶或是擔孢子中大量表現，因此本研究欲探討菇類轉形系統是否具有表現部位差異，以提供未來發展口服疫苗食用部位之參考。使用前人建立經序列刪減之金針菇甘油醛-3-磷酸脫氫酶 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, gpd) 啟動子 (gpd

-d1) 表現報導基因綠色螢光蛋白質，而篩選標誌採用金針菇來源之萎鏽靈抗性基因 (carboxin resistance gene, cbr)。探討異源基因表現部位之差異，分為菌絲體以及子實體之蕈柄、蕈傘、擔孢子等四個部位，並同時探討鮑魚菇表現金針菇來源之啟動子與篩選標誌之可行性。為方便擔孢子分析，選用可大量產生擔孢子之鮑魚菇 (Pleurotus ostreatus) 做為表現宿主。結果顯示於篩選培養基可順利篩選出鮑魚菇轉形株，並確認目標基因嵌入至宿主染色體 DNA 與綠色螢光蛋白質表現，證明金針菇來源之 gpd-d1 啟動子與篩選標誌可於鮑魚菇中表現，拓展金針菇萎鏽靈篩選標誌跨物種之應用；

另外不同部位異源基因分析結果發現，蕈柄與菌絲體總可溶性蛋白質中之綠色螢光蛋白質表現量最高，而訊息 RNA 則以擔孢子表現量較高。不同部位異源蛋白質表現量分析結果，可提供未來菇類分子農場發展之參考。