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斑馬魚CXC化學激素在緊迫因子影響下之表現與CXC-64啟動子活性之調控分析

為了解決G-PRO GR10的問題，作者陳莉臻 這樣論述：

化學激素可使白血球產生趨化性的遷移作用，其與白血球發育、淋巴器官成熟和分化以及免疫系統恆定有關，也同時在免疫與發炎反應中扮演重要的角色。依據其結構可以被區分成 CXC、CC、C 和 CX3C 四類，其中 CXC 和 CC 是成員最多的化學激素次家族。本研究利用斑馬魚作為探討 CXC 化學激素的模式動物。斑馬魚 (Danio rerio) 已有五種 CXC 化學激素的 cDNA 被發表在 GenBank，分別將它們標示為 CXC-46、-56、-64、-66 及 scyba。由親緣分析發現斑馬魚的 scyba 基因與其他物種的 CXCL14 次群集最為類似，而 CXC-46 則與人類 CCL2

5 及鯰魚的類 CXCL-2 基因相近，CXC-56、-64 及 -66 則與鯰魚CXCL10的演化分支最為接近。進一步利用半定量 RT-PCR 方法分析 mRNA，研究五種 CXC 化學激素基因的表現是否具有組織、脂多醣 (LPS) 刺激及聚肌?酸-聚胞?酸 (poly I: poly C) 刺激的專一性，結果顯示 CXC-56 基因在眼睛、魚鰭、心臟、肝臟、肌肉及皮膚等組織中屬於固有的表現基因。和對照組比較，飢餓對斑馬魚的化學激素基因包括 CXC-56、-64、-66 及 scyba 有顯著的影響；在 LPS 的刺激下，斑馬魚化學激素基因的表現量呈現 concave 的形態；而 poly

I: poly C 在 0.1 至 1 μg /mL 的處理下呈現劑量相關性。除了 CXC-64 基因表現量不明顯之外，水溫及酸鹼度會刺激其他化學激素基因的表現。本研究結果顯示斑馬魚 CXC 化學激素可以作為各種不同緊迫因子影響的測試指標。將斑馬魚化學激素 CXC-64 基因的 genomic DNA 選殖並定序出來，顯示其與人類 CXCL11 及鯰魚 CXCL10 基因最為類似。CXC-64 基因的長度約有 4.0 kb，並帶有四個外顯子 (exon) 及三個內含子 (intron)，與人類的 CXCL11 基因類似，而其啟動子區域包含了典型的 TATA box 及多種的轉錄因子結合序列。為

了解 LPS、poly I: poly C 及腫瘤壞死因子 (TNF-α) 在調控斑馬魚化學激素 CXC-64 基因表現上所扮演的角色，將選殖出來的啟動子序列轉染進入 RAW 264.7 (類老鼠巨噬細胞) 及 ZFL (斑馬魚肝臟細胞) 細胞株後，結果顯示 LPS 及 TNF-α 處理組的 RAW 264.7 細胞株之啟動子活性，呈現劑量相關性，而 ZFL 細胞株的啟動子活性則僅與 LPS 呈現劑量相關性。本研究結果顯示 LPS 可以在人類及魚類細胞株中誘發斑馬魚 CXC-64 化學激素基因的啟動子活性。