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利用昆蟲桿狀病毒表現系統同時表達豬生殖與呼吸道綜合症病毒之異源性結構蛋白

為了解決GP5的問題，作者賴以敏 這樣論述：

目次摘要 iAbstract ii目次 iii表目次 vi圖目次 vii第一章 文獻回顧 1第一節 豬生殖與呼吸道綜合症 11.1.1 歷史背景與防治 11.1.2 流行病學分析 21.1.3 病毒之特性 41.1.3.1 基因組成 41.1.3.2 非結構蛋白 51.1.3.3 結構蛋白 61.1.4 臨床症狀與病理變化 71.1.5 商業化疫苗 8第二節 類病毒顆粒 9第三節 蛋白質表現系統 101.3.1 原核細胞表現系統 101.3.2 真核細胞表現系統 111.3.2.1 酵母菌表現系統 111.3.2.2 哺乳動物細胞表現系統 111.3

.2.3 昆蟲細胞表現系統 12第四節 桿狀病毒表現載體系統 121.4.1 桿狀病毒簡介 121.4.2 病毒之感染過程 131.4.3 病毒之膜融合蛋白 141.4.4 昆蟲細胞-桿狀病毒表現系統 15第二章 材料與方法 17第一節 實驗目的與架構 17第二節 質體構築 182.2.1 樣本來源 182.2.2 製備乳劑 182.2.3 核酸萃取 192.2.4 反轉錄聚合酶連鎖反應 192.2.5 RT-PCR產物之電泳與純化 192.2.6 Blunt end 選殖技術 202.2.7 質體轉型 202.2.8 質體之篩選 202.2.9 序列分析

212.2.10 質體保菌和萃取 21第三節 中間載體 (pBac4x-1) 與病毒重組基因片段之質體構築 222.3.1 限制酵素切割作用 222.3.2 洋菜膠體萃取DNA片段與載體片段及純化 222.3.3 接合作用與質體轉型 222.3.4 重組質體之定序及保菌 232.3.5 重組質體之保存 23第四節 桿狀病毒DNA (flashBacTM Prime) 與重組之PRRSV基因轉染昆蟲細胞 242.4.1 flashBacTM桿狀病毒表現系統 242.4.2 昆蟲細胞 242.4.3細胞培養 242.4.4 細胞凍存 252.4.5 桿狀病毒載體轉染昆蟲細胞

252.4.6 增殖重組桿狀病毒 252.4.7 挑選高力價病毒 262.4.8 重組桿狀病毒之力價分析 26第五節 重組桿狀病毒之蛋白質分析 272.5.1 聚丙烯醯胺膠體電泳分析與西方墨點法 27第三章 結果 29第一節 質體構築之確認 293.1.1 目標基因與pJET1.2/blunt end cloning載體之構築 293.1.2 重組pBac4x-1桿狀病毒中間質體之製備 29第二節 重組桿狀病毒之製備 30第三節 重組桿狀病毒之挑選與力價分析 31第四節 Western blot分析目標蛋白之表現 31第四章 討論 33第五章 參考文獻 37Ap

pendix 1. Table of reagent recipe used in experiment 62Appendix 2. Map and features sequence of pJET1.2/blunt cloning vector 65Appendix 3. Map and features sequence of pBac4x-1 cloning vector 66Appendix 4. Alignment of the recombinant PRRSV genes in pJET1.2 plasmids with NCBI amino acid sequence

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