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而第二篇論文國防醫學院 生命科學研究所 戴晶瑩所指導 陳伊婷的 神經鈣粘蛋白之胞吞作用在早期神經元發育上的角色 (2016),提出因為有 神經鈣粘蛋白、胞吞作用、β-連環蛋白、神經軸索生長的重點而找出了 GP5311 ptt的解答。
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Rab37介導IL-6分泌活化STAT3訊息傳遞使巨噬細胞極化成為M2進而促進肺癌進程
為了解決GP5311 ptt 的問題,作者楊侑恩 這樣論述:
研究背景:腫瘤微環境中的癌細胞與免疫細胞交互作用參與癌症的進程。我們初步的研究結果顯示,相較於野生型 (wild-type, WT) 老鼠,Rab37全身剃除 (knockout, KO) 老鼠有明顯的抑制皮下腫瘤生長的現象;有趣的是,我們進一步發現在Rab37 KO 老鼠皮下腫瘤中,促進腫瘤生長的M2型態巨噬細胞浸潤的數量明顯的少於WT老鼠的皮下腫瘤,這些結果也暗示Rab37在腫瘤微環境中,擁有促腫瘤生長的潛力。然而,Rab37在巨噬細胞中所扮演的角色仍然尚未清楚。研究目的: 由於Rab37在上皮細胞已知調控胞吐作用 (exocytosis),本研究想探討Rab37趨化巨噬細胞走向M2型態
極化的胞吐作用及機制。研究結果: 根據即時逆轉錄聚合酶連鎖反應 (RT-qPCR) 和流式細胞儀 (flow cytometry) 實驗結果顯示,Rab37 KO 老鼠之骨髓源性巨噬細胞 (bone marrow-derived macrophages,BMDMs) 較易極化為M1巨噬細胞。為了探討此極化現象是否與Rab37所調控的分泌蛋白有關,我們分別從WT和Rab37 KO的老鼠中取出BMDMs 進行細胞激素/趨化激素陣列分析 (cytokines and chemokines array),結果顯示白血球介素6 (interleukin 6, IL-6) 的分泌與Rab37的表現呈現正相
關;我們也在老鼠巨噬細胞株RAW264.7 cells之囊泡分離 (vesicle isolation) 的實驗中,證實IL-6的確存在於Rab37所調控的囊泡中;進一步我們藉由酵素結合免疫吸附分析法 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 和免疫螢光染色 (immunofluorescence, IF) 驗證Rab37以鳥苷核苷酸依賴性的方式 (GTP-dependent manner) 調控IL-6的分泌。另外,我們在DNA微陣列分析中發現第一型干擾素 (type I interferon, type I IFN) 的訊息傳遞路徑,在肺癌細胞的
培養液處理下,Rab37缺失的BMDMs基因圖譜中有上調的現象。利用RT-qPCR驗證基因富集分析 (Gene Set Enrichment Analysis, GSEA) 和信息路徑分析 (pathway analysis),篩選出的IFNα/β與信號轉導及轉錄激活蛋白1 (Signal transducer and activator of transcription 1, STAT1) 下游的干擾入誘導基因 (interferon stimulated genes, ISGs),的確在Rab37缺失的BMDMs有上調的情形;相反的,在巨噬細胞中過表現Rab37時,能抑制這些基因的表現和I
FNβ的分泌,同時增加M2巨噬細胞的基因表達。我們進一步以西方墨點法 (Western blotting) 與免疫螢光染色證實,Rab37會藉由調控IL-6分泌,活化下游的STAT3促進M2巨噬細胞極化,同時抑制STAT1與其下游的第一型IFN相關基因表現。結論: 我們的結果揭露了Rab37介導IL-6分泌,抑制第一型IFN訊號路徑的新機制,進而趨化巨噬細胞走向M2型態。這可能有助於未來開發,以腫瘤微環境的巨噬細胞中Rab37/IL-6樞紐為標靶的治療策略。
神經鈣粘蛋白之胞吞作用在早期神經元發育上的角色
為了解決GP5311 ptt 的問題,作者陳伊婷 這樣論述:
神經軸索生長是早期神經發育時很重要的步驟。在神經發育過程中,神經軸索生長能夠幫助神經元透過彼此之間建立正確的神經連結、與目標神經元形成突觸來建構出複雜的神經網絡。神經軸索生長的過程是一個神經元接受並統整胞外信號以及胞內訊息傳遞反映出來的結果。在神經軸索生長過程中,細胞粘黏蛋白的內吞作用扮演了一個很重要的角色。細胞粘黏蛋白的內吞作用能夠增加細胞膜的膜動態以及調整細胞彼此之間粘黏的附著力,這些都能夠促進發育中的神經軸索生長。神經鈣粘蛋白(N-鈣粘蛋白)是鈣粘蛋白超家族的一員,需要鈣離子的結合才能發揮功能。在神經元的早期發育過程中,神經鈣黏蛋白是其中一種很重要的細胞粘黏蛋白。然而,縱使神經鈣黏蛋白
的胞吞作用極為可能參與在調控神經軸索生長的過程中,其內吞機制目前仍尚未明朗。在我的研究裡,我發現部分膜上的神經鈣黏蛋白透過網格蛋白介導的胞吞作用由膜上被內吞進細胞內。這個內吞的過程是透過連接複合體(AP-2 complex)上的μ2次單元來辨識位於神經鈣黏蛋白(蛋白質鏈)C 末端的兩個酪氨酸區域。另外,與神經鈣粘蛋白緊密結合的β-連環蛋白則是在此內吞作用中,透過與神經鈣粘蛋白的結合遮蔽住該被μ2 次單元辨識的兩個酪氨酸區域。透過暫時分開β-連環蛋白與神經鈣粘蛋白的結合能夠促進μ2 次單元來辨識這兩個酪氨酸區域以增加透過網格蛋白介導的胞吞作用被內吞的神經鈣粘蛋白。增加神經鈣粘蛋白的內吞作用,在不
影響穩定狀態下位於膜上的神經鈣粘蛋白總量之下,促進了神經軸索的生長。我更進一步發現,大腦衍生神經滋養因子(BDNF)不止促進神經軸索的生長,也增加神經鈣粘蛋白被內吞的比例。這可能是由於大腦衍生神經滋養因子(BDNF)能夠促進β-連環蛋白上面第654 個氨基酸(酪氨酸)的磷酸化,以減少β-連環蛋白與神經鈣粘蛋白的結合,進而促進神經鈣粘蛋白的內吞作用。總而言之,我的研究成果解釋了神經鈣粘蛋白如何透過β-連環蛋白影響它與μ2次單元的結合來調控自己的內吞作用,來進一步調控神經軸索生長。
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