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文心蘭與阿拉伯芥中調控花器老化及脫離相關基因之選殖與功能性分析

為了解決GR Corolla的問題，作者李姵芳 這樣論述：

在阿拉伯芥中異位表現Forever Young Flower (FYF)會造成轉殖株提早開花和延遲花器的老化與脫離。為進一步分析FYF在阿拉伯芥中調控的下游基因，將35S::FYF-GR轉基因植物以DEX誘導，再進行cDNA微陣列分析(microarray)的實驗後得到一些受FYF促進與抑制的下游基因，其中五個受FYF促進的基因（DTF1，DTF2，AtERF95，AtERF96與AtERF98）被選殖與進一步探討。異位表現AtERF95、AtERF96與AtERF98之轉基因植物其外表型與野生型阿拉伯芥無差異，而35S::DTF2則出現晚開花、延遲花器老化與脫離的性狀，此外，35S::DT

F1更造成植株矮小、晚開花、延遲花器老化與脫離的性狀。為了解DTF1與DTF2的表現位置與其功能之關係，我們利用啟動子分析實驗將DTF1::GUS或DTF2::GUS構築載體轉殖入阿拉伯芥中，結果顯示此兩種轉殖株在授粉前花苞之花萼與花瓣可以偵測到較強的GUS活性，且隨著花朵的成熟與老化其GUS的活性逐漸降低，由此可知，DTF1與DTF2與花器的老化與脫離相關。經即時定量聚合&;#37238;鏈鎖反應(real-time PCR)的結果顯示，與乙烯訊息傳遞相關之部份基因在35S::DTF1與35S::DTF2轉基因植物中受到抑制。將35S::DTF1轉基因植物以乙烯處理後，葉片老化之情況比野生型

植物輕微；而35S::DTF2轉基因植物以乙烯處理後，花器老化與脫離之性狀比野生型輕微。因此DTF1與DTF2可能影響乙烯的訊息傳遞。在部分花器老化(senescence)與脫離(abscission)相關基因中，HAESA-LIKE2 (HSL2)在35S::DTF1轉基因植物中被抑制；BLADE-ON-PETIOLE 2 (BOP2)、INFLORESCENCE DEFICIENT IN ABSCISSION (IDA)與HAESA在35S::DTF2轉基因植物中受到抑制。這些結果顯示DTF1與DTF2經由抑制乙烯的訊息傳遞與降低IDA、HAESA和HSL2之基因表現，以控制花器的老化與脫

離。第二章　　文心蘭OnFYF基因與阿拉伯芥之FYF具有高度相似性，其基因轉譯出含225個胺基酸的MADS box蛋白質。在阿拉伯芥中異位表現OnFYF也會出現提早開花和延遲花器老化與脫離之性狀。這些結果意味著OnFYF在文心蘭中也扮演類似FYF的功能，即調控花器的老化與脫離。由此可知，OnFYF與花器的老化與脫離相關。將35S::OnFYF轉基因植物以乙烯處理之後，能延遲葉片之老化，顯示OnFYF可能影響乙烯的訊息傳遞造成轉基因植株比野生型植物不易老化。