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利用透明質酸備製聚電解質多層膜進行無標記篩選與擴增肝臟癌症幹細胞

為了解決JBL bar 9.1 PTT的問題，作者莊竣傑 這樣論述：

目錄指導教授推薦書口試委員會審定書中文摘要......... iii英文摘要..........v目錄................ vii圖目錄...............x表目錄............ xii第一章 序論 11.1　前言 11.2　研究動機與目的 11.3　實驗架構 3第二章　相關研究與文獻 42.1 癌症幹細胞 42.1.1　癌症幹細胞之特性 42.1.2　微環境(microenvironment)對癌症幹細胞的影響 72.1.3　目前三種篩選癌症幹細胞的方法 82.1.3-1　抗體磁珠標定細胞表面

的特異性蛋白 82.1.3-2　活體螢光染劑分選低殘留量之細胞 92.1.3-3　放射線照射後有部份細胞進行DNA修復 92.2　肝臟癌症幹細胞與肝癌 102.2.1　引起肝癌的途徑 102.2.2　目前肝癌治療方式與瓶頸 102.2.3　肝臟癌症幹細胞標記 112.2.4　細胞聚落的特性 122.2.5　透明質酸(hyaluronan, HA)對癌症的影響 132.3　聚電解質多層膜(Polyelectrolyte Multilayer Films, PEM) 162.3.1　聚電解質多層膜特性與相關應用 162.3.2　聚電

解質多層膜逐層塗佈之結構影響 172.3.3　聚電解質多層膜應用於細胞培養與其影響因素 18第三章　材料與方法 213.1　原料與藥品 213.2　藥品配製 223.3　儀器設備 233.4　玻璃片前處理及聚電解質溶液配置 243.4.1　玻璃片前處理 243.4.2　正電之聚電解質溶液-PAH 253.4.3　負電之聚電解質溶液-HA 253.4.4　PAH、HA溶液製備 253.5　HA 單層備製過程 253.6　聚電解質多層膜逐層塗佈之流程 253.7　石英微量天秤(QCM) 273.8　細胞培養及型態觀

察 273.8.1　肝臟癌症細胞株(Huh-7)的培養 273.8.2　以聚電解質多層膜篩選肝臟癌症幹細胞之最適化評估 273.9　生化分析 283.9.1　MTT細胞活性分析 283.9.2　LDH細胞毒性分析 283.9.3　Live/Dead活性分析 293.9.4　聚電解質多層膜篩選之癌症幹細胞表面標記分析 303.9.5　抗癌藥物敏感度與抗藥性測試 303.9.6　RT-q-PCR檢測特異性基因 31第四章　實驗結果與討論 344.1　石英微量天秤之吸附測試 344.2　 Huh-7於不同濃度單層的透明質酸之細胞

型態 364.2　Huh-7於不同濃度組成的聚電解質多層膜之細胞型態 374.3　Huh-7於濃度3mgl/mL組成的聚電解質多層膜之細胞型態 394.5　生化分析 424.5.1　MTT之分析與探討 424.5.2　LDH之分析與探討 434.5.3　Live/Dead之分析與探討 454.5.4　Huh-7於(PAH/HA)第3、5、7天之特異性細胞表面蛋白分析 464.5.5　Huh-7於(PAH/HA)第3天與第7天之抗癌藥物分析 574.5.6　特異性基因表現之分析 59第五章　結論 61參考文獻 63圖目錄圖1

　實驗架構 3圖2　聚電解質多層膜逐層塗佈步驟示意圖 26圖3　石英微量天秤震盪頻率分析圖 34圖4　 Huh-7於不同濃度HA之細胞形態(100X，scale bar = 50μm) 36圖5　 Huh-7 於PAH/HA培養5天後之細胞形態(100X，scale bar=50μm) 37圖6　Huh-7於系列PAH/HA培養後之細胞形態(100X，scale bar=50μm) 40圖7　Huh-7 於(PAH/HA)3.0第3、5、7天之三維球狀大小與菌落數 40圖8　Huh-7於系列PAH/HA培養3天與7天後之細胞活性分析圖 42圖9　

Huh-7於系列PAH/HA培養3天與7天後之細胞毒性分析圖 44圖10　 Huh-7於系列PAH/HA之Live/Dead螢光檢測圖(scale bar = 50μm) 46圖11　Huh-7於控制組第3、5、7天之CD133/CD44雙染圖 47圖12　Huh-7於(PAH/HA)1.0第3、5、7天之CD133/CD44雙染圖 47圖13　Huh-7於(PAH/HA)2.0第3、5、7天之CD133/CD44雙染圖 47圖14　Huh-7於(PAH/HA)3.0第3、5、7天之CD133/CD44雙染圖 48圖15　Huh-7於控制組第3、5、7天之E

pCAM/CD133雙染圖 50圖16　Huh-7於(PAH/HA)1.0第3、5、7天之EpCAM/CD133雙染圖 50圖17　Huh-7於(PAH/HA)2.0第3、5、7天之EpCAM/CD133雙染圖 51圖18　Huh-7於(PAH/HA)3.0第3、5、7天之EpCAM/CD133雙染圖 51圖19　Huh-7於控制組、(PAH/HA)1.0、2.0、3.0第3、5、7天之CD133/CD44雙染圖(*P