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國立臺灣海洋大學 水產養殖學系 周信佑所指導 陳威尹的 青海菜及蘇氏海木耳水萃物對鞍帶石斑魚成長、免疫以及抗溶藻弧菌之影響 （2021），提出K88關鍵因素是什麼，來自於青海菜、蘇氏海木耳、飼料添加劑、成長、免疫基因、腸道組織切片。

而第二篇論文國立宜蘭大學 生物技術與動物科學系生物技術碩士班 陳威戎所指導 郭美儀的 探討陽離子抗菌胜肽對多重抗藥性腸毒型大腸桿菌之 抗菌機制並用蛋白質晶片分析其結合標的 （2021），提出因為有 抗菌胜肽、多重抗藥性、腸毒型大腸桿菌的重點而找出了 K88的解答。

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青海菜及蘇氏海木耳水萃物對鞍帶石斑魚成長、免疫以及抗溶藻弧菌之影響

為了解決K88的問題，作者陳威尹 這樣論述：

本研究將青海菜 (Monostroma nitidum) 及蘇氏海木耳 (Sarcodia suiae) 經由熱水萃取，探討其作為飼料添加劑投餵給鞍帶石斑魚，對石斑魚成長、免疫能力，以及對溶藻弧菌 (Vibrio alginolyticus)的抗病效果，以此了解這兩種海藻萃取物對鞍帶石斑魚的生物活性。本研究先以高溫高壓滅菌釜進行加熱、再以高速離心 (5,000 rpm) 過濾，最後冷凍乾燥取得青海菜及蘇氏海木耳萃取物，經由分析青海菜萃取物總碳水化合物含量為 0.092 mg/mL，而蘇氏海木耳萃取物為0.08 mg/mL，且將萃取物混合L15培養基共培養石斑魚鰭細胞24小時觀察到其不具有細胞

毒性。接著以商用飼料作為控制組，而海藻萃取物混合飼料作為實驗組，投餵為期28天。每14天稱重，計算成長表現，並採集第1及28天腸道，測量前腸、中腸及後腸絨毛長度與腸壁厚度。再於投餵後第1、7、14、21及28天採集脾臟及頭腎，觀察期間的免疫基因表現。最後以溶藻弧菌 (106 CFU/mL，100 μL/fish) 進行攻毒試驗。實驗組分別為含有0.2%青海菜萃取物組別 (M1)，2%青海菜萃取物組別 (M2)；0.2%蘇氏海木耳萃取物組別 (S1)，2%蘇氏海木耳萃取物組別 (S2)。結果顯示，投餵海藻萃取物的成長表現比一般飼料好，其中M1組增重率為152.42 ± 34.24%、飼料轉換率為

1.01 ± 0.16、日成長率為3.0 ± 0.47%，在各處理組間效果最佳。第28天腸道組織切片顯示，投餵青海菜萃取物的腸道絨毛及腸壁厚度皆比控制組高，投餵蘇氏海木耳的腸壁厚度比控制組高；比較第28天與第1天的絨毛及腸壁顯示，青海菜萃取物對絨毛長度影響較好，而蘇氏海木耳萃取物對腸壁厚度影響較好。在溶藻弧菌攻毒實驗中，投餵海藻萃取物的相對活存率介於22%~41%之間，顯示萃取物能提高鞍帶石斑魚的抗病能力。在基因表現觀察到投餵海藻萃取物能夠誘發細胞免疫相關基因TLR5s 、IL-1β、 IL-6、IL-8及IgM。本研究結果顯示青海菜及蘇氏海木耳萃取物作為飼料添加劑，能提升鞍帶石斑魚成長表現，

且具有誘發免疫基因表現以達到對溶藻弧菌的保護能力。

探討陽離子抗菌胜肽對多重抗藥性腸毒型大腸桿菌之 抗菌機制並用蛋白質晶片分析其結合標的

為了解決K88的問題，作者郭美儀 這樣論述：

由腸毒型大腸桿菌引起的仔豬離乳後腹瀉是常見的疾病，會造成其死亡並對養豬產業帶來重大的經濟損失。為了治療豬離乳後腹瀉疾病，濫用抗生素導致多重耐藥性 (multidrug-resistance, MDR) 細菌大量產生的問題日益嚴重，迫切需要尋求或開發新的抗菌製劑。抗菌胜肽 (Antimicrobial peptides, AMPs) 為一種新穎抗菌製劑，其富含正電，因此能選擇性地與帶負電的細菌細胞膜作用，達到抗菌的效果。實驗室前人已設計合成並優化出對多重抗藥性腸毒型大腸桿菌 (enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC) 具有抑菌能力的AMPs，本研究目的為探

討AMPs對ETEC的抗菌作用與機制。首先，經由最小抑菌濃度 (Minimal inhibitory concentration, MIC) 實驗找出最有效之AMP，Q4-15a-1，MIC值為 4 μg/mL。動態殺菌曲線試驗證實其在低濃度 (4 μg/mL與 8 μg/mL) 時抑菌, 高濃度 (16 μg/mL與 32 μg/mL) 時殺菌。穿透式電子顯微鏡的結果發現Q4-15a-1的作用下ETEC出現膜裂解與細胞質外流的情況。通過共軛焦顯微鏡搭配螢光染色試驗觀察細胞膜的滲透性，結果表明在Q4-15a-1的作用下，ETEC膜的通透性增加。此外，研究利用螢光FITC標記Q4-15a-1，尋

找胜肽的作用位置, 結果指明Q4-15a-1首先會黏附在細胞膜上，之後累積在細菌體內。通過核酸結合實驗證明Q4-15a-1有能力與核酸結合。為了進一步了解 Q4-15a-1的抗菌機制，與國立成功大學合作共同應用包含了近 4300 種純化之大腸桿菌蛋白質所製備之蛋白質體微陣列晶片，找出141種與Q4-15a-1 結合之標的蛋白質並利用生物資訊的分析工具KEGG pathway, InterPro, GO analysis分析結合標的。接著以豬腸道上皮細胞 (porcine intestinal epithelial cells, IPEC-1) 為感染模型，進行感染並利用即時定量式聚合酶連鎖反應

技術了解Q4-15a-1抗發炎的能力，結果證明Q4-15a-1可以降低發炎因子基因的表現量，有抗發炎的能力。綜上所述，Q4-15a-1是具有潛力替代抗生素的抗菌製劑。

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