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臺北醫學大學 醫學檢驗暨生物技術學系所 吳雪霞所指導 盧春蘭的 建立以 PCR-DNA 定序為基礎之分子生物學方法於臨床檢體鑑定真菌之評估 （2017），提出R nineT Pure關鍵因素是什麼，來自於侵襲性真菌感染、內轉錄、區、定序分析。

而第二篇論文國立成功大學 醫學檢驗生物技術學系碩博士班 張長泉所指導 鄭伊珊的 以DNA晶片鑑定結核桿菌及非結核分枝桿菌 （2009），提出因為有 結核病、分枝桿菌、鑑定的重點而找出了 R nineT Pure的解答。

最後網站BMW R nineT Pure 2021 Test - 1000PS.de則補充：Auf der neuen R nineT Pure genießt man eine angenehm neutrale Sitzposition, wie man sie von einem Naked Bike kennt. Doch alleine der Blick auf ...

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建立以 PCR-DNA 定序為基礎之分子生物學方法於臨床檢體鑑定真菌之評估

為了解決R nineT Pure的問題，作者盧春蘭 這樣論述：

侵襲性真菌感染的發病率隨著免疫系統受損之病患的增加而顯著升高，侵襲性真菌感染所引發的系統性感染症在臨床上有著高的發病率和死亡率。真菌的檢測主要是以真菌培養為標準方法，傳統鑑定主要是依據真菌的形態、生長以及生理生化等特徵對真菌進行分類。然而真菌的種類繁多，個體多態性明顯，而且其生長、生理生化特徵也會隨著環境的變化而不穩定。傳統真菌診斷的問題，需另外尋找準確且快速的鑑定方法。本研究主要以侵襲性真菌感染中真菌菌血症(Fungemia)為研究族群。以新北市某醫學中心菌庫中所收集的真菌菌株進行培養、DNA的萃取，選取ITS (internal transcribed spacer)基因序列將該片段進行

PCR增幅，接著以Sanger定序法進行DNA定序，藉由DNA序列差異鑑別真菌菌種，ITS區域中的變異區段具有菌屬或菌種特異性，以及菌株間的鹼基對差異性，可廣泛偵測到多數真菌種類。接著利用剩餘的全血血品作基質，模仿真菌菌血症檢體進行檢測，建立以PCR-DNA定序為基礎之分子生物學方法於臨床檢體鑑定真菌。本研究一共測試真菌分類共七菌屬十六菌種，包括Candida species (6種)、Aspergillus species (4種)、Cryptococcus neoformans、Fusarium species、Penicillium marneffei、Trichosporon asah

ii、Rhodotorula species，及Fusarium species。所有菌株(含參考菌株9株及臨床分離菌株154株)以ITS序列分析鑑定之一致性為95.09 %(155/163)，全數可鑑定至菌屬程度以上。另外，Panfungal PCR分析靈敏度為100 fg/uL Candida albicans genomic DNA及模擬真菌菌血症血液105~560 CFU/mL。ITS定序分析是一種深具潛力的鑑定工具，可提供臨床真菌診斷輔助。

以DNA晶片鑑定結核桿菌及非結核分枝桿菌

為了解決R nineT Pure的問題，作者鄭伊珊 這樣論述：

結核病(tuberculosis)在全球每年約有920萬新案例，造成約170萬人死亡，是全世界公共健康的大問題。最近三年(95-97)台灣每年有14500-16500肺結核病例(63-73例/10萬人口)。傳統方法分離及鑑定分枝桿菌，約需2至8星期。正確及快速地鑑定分枝桿菌，對病人的治療及管理很重要。本研究之目的在開發寡核?酸晶片(oligonucleotide array)以鑑定分枝桿菌，包括6種屬於Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC)的細菌和19種較常見的非結核分枝桿菌(nontuberculous mycobacteria, NTM)。由細

菌的16S-23S rRNA基因間的intergenic spacer ( ITS )區域及gyrB基因設計探針，把探針固定在尼龍膜上，與標識毛地黃素(digoxigenin) 的PCR產物雜合反應(hybridization)後，再以標記鹼性磷酸?(alkaline phosphatase)的抗體呈現反應結果。經測試250株(88株參考菌株及162株臨床菌株)目標菌株(target strain)及73株非目標菌株(nontarget strain)後，晶片鑑定的靈敏度(sensitivity)和特異性(specificity)分別為98.8% (246/249)及98.6% (72/73)

，且MTBC中所有菌種均可被正確鑑定(M. africanum及M. pinnipedii除外)。晶片的檢測極限(detection limit)為每測試(assay)中含50 fg (M. tuberculosis H37Rv)或500 fg (M. abscessus CCUG 20993T)的DNA。 以晶片檢測205個BACTEC MGIT 960 (Becton Dickinson Biosciences Microbiology Products, Sparks, MD, USA)陽性培養管中的分枝桿菌，再和經次培養(subculture)並以PCR restriction

endonuclease assay (PRA)鑑定的結果比較，在75個以RFLP檢測到MTBC的培養管中，晶片均檢測到MTBC。在12個以RFLP檢測不到MTBC的培養管中，晶片可以檢測到M. tuberculosis。有37個MGIT管以晶片檢測到含二種以上的分枝桿菌(RFLP均只有檢測到一種細菌) ，另有43管晶片鑑定的結果和RFLP的方法不符合，這些含二種以上的分枝桿菌和不符合的樣品正以第三種方法分析中。 以晶片直接檢測20個經消化去汙染檢體(12個痰、4個肺泡沖洗液、及3個其他檢體)中的分枝桿菌，其中14個抗酸性染色陽性，6個陰性。並和AmplicorTM PCR Mycobac

terium tuberculosis test (Roche Diagnostic Systems, Inc., Branchburg, NJ, USA)的結果做比較。在這20個檢體中AmplicorTM 系統檢測到18個含有MTBC，而晶片偵測到19個含有M. tuberculosis (或MTBC)，且其中16個檢體含有二種或以上分枝桿菌。由於晶片對M. tuberculosis的檢測極限(50 fg/assay,等於103 CFU/ml)，靈敏度約等於抗酸性染色的10倍(104 CFU/ml)，除了純菌以外，預期晶片可以直接檢測臨床檢體中的分枝桿菌，但仍需測更多的檢體以確認。晶片的雜合

檢測時間約為8小時。

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