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探討在小鼠羊水幹細胞引發免疫抑制的可溶性因子

為了解決bt601是什麼胎的問題，作者賴韻仁 這樣論述：

間葉幹細胞是一群紡錘狀貼附型成體幹細胞，具多能分化特性。近來的研究證據顯示MSC具有抑制異體T淋巴球、B細胞、NK細胞和樹突狀細胞活性的能力。本實驗室先前研究已從帶有GFP基因的C57BL/6懷孕母鼠的羊水中分離出一株細胞，命名為AFSC-1(Amniotic Fluid-derived Mesenchymal Stem Cell-1)，經定性與活性的評估，發現AFSC-1具有幹細胞的特性，且不具有癌化細胞的特性，進一步分析發現AFSC-1具有抑制異體T細胞的特性，Transwell 實驗結果證明該抑制性反應與可溶性分子釋放相關。相關文獻證實MSC在抑制異體T細胞時，可溶性因子例如IL-10

、IL-6、TGF-β1、IFN-γ、NO參與反應。 另外， Regeneration and Tolerance Factor(RTF)是一個70k Da的vacuolar ATPase (v-ATPase)，最早於胎盤絨毛膜組織中發現，目前已知該蛋白廣泛存在於人類(hRTF)和小鼠(mRTF)的細胞膜上。mRTF可分為50k Da膜上蛋白與20k Da膜外蛋白，後者可引發免疫抑制的細胞激素IL-10釋放，在in vitro的實驗中發現mRTF因子具有抑制異體T淋巴球反應的活性，推論mRTF具有免疫抑制的活性。因此，本實驗的目的是確認參與羊水幹細胞抑制異體T細胞增生反應的可溶性分子為何和探討

mRTF因子是否在小鼠AFSC-1所引發的抑制異體T細胞作用中扮演重要的角色。 實驗結果顯示IL-10、TGF-β1、IFN-γ等因子在AFSC-1與異體T細胞共同培養時，表現量呈現下降的趨勢，顯示此三種細胞激素不是主要參與AFSC-1抑制異體T細胞的調控因子；而IL-6在AFSC-1與異體T細胞共同培養時表現量顯著上升，進一步以抗小鼠IL-6中和型抗體加入至AFSC-1和異體T細胞共同培養時，T細胞增生能力並未恢復，表示IL-6並不是參與AFSC-1抑制異體T細胞增生的主要調控因子。而後檢測AFSC-1與異體T細胞共同培養時的上清液，隨著培養時間的增加，NO的表現量有明顯上升的趨勢，表

示NO可能參與AFSC-1抑制異體T細胞反應。而在mRTF的研究結果上，未活化的CD3＋T細胞、受Con A刺激的CD3＋T細胞以及CD4＋CD25＋FoxP3＋ Treg細胞與AFSC-1均會表現mRTF。當AFSC-1與受Con A刺激的T細胞共同培養不同時間後，AFSC-1其mRTF表現有減少的趨勢，而T細胞的mRTF在mRNA表現量有隨著培養時間增加而有上升的趨勢；接下來探討當AFSC-1與活化後的T細胞共同培養時，AFSC-1的mRTF因子是否因為T細胞的釋放出什麼細胞激素而導致表現量下降，因此將AFSC-1與IFN-γ共同培養不同時間後，隨著時間增加mRTF也增加表現量，但在培養4

8小時候開始有下降的趨勢。發現AFSC-1其mRTF因子的表現量在與受Con A活化的T細胞共同培養後有下降。接下來利用專一性V-ATPase inhibitor：Concanamycin A(CMA)分別抑制AFSC-1與受Con A活化的T細胞，結果顯示經過CMA作用後在與AFSC-1抑制Con A活化異體T細胞的作用則明顯減弱，說明AFSC-1中mRTF的表現與其抑制活性有關。另外，本實驗也生產出一株抗mRTF 50k Da 的兔子多株抗體，可成功偵測AFSC-1中mRTF的表現。未來將以RNA interference抑制mRTF的活性或表現的方式，進行確認mRTF在AFSC-1所引發

的抑制異體T細胞作用中所扮演的角色。除此外，未來也將利用加入iNOS抑制劑來檢測NO參與AFSC-1抑制異體T細胞反應中所扮演的角色。