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一種羧酸酯酶對小菜蛾脫芬瑞抗藥性的影響

為了解決flower garden vector的問題，作者葉庭維 這樣論述：

小菜蛾 (Plutella xylostella) 是現今被認為對十字花科植物最具威脅性的害蟲，對許多不同機制的殺蟲劑都已經產生抗藥性，本論文針對田間常用的四種殺蟲劑 (剋安勃、因滅汀、脫芬瑞、氟大滅) 進行抗性篩選，之後搭配先前實驗室的小菜蛾次世代定序 (Next Generation Sequencing) 資料，分別挑出上述四個殺蟲劑抗性品系與當時第一子代相比 FPKM (Fragments Per Kilobase of transcript per Million mapped reads) 值有 3 倍以上差異，並從每個抗性品系中挑選出 4 個差異表現最高，且屬於細胞色素 P45

0 單氧化酶 (Cytochrome P450 monooxygenase)、穀胱甘肽-S-轉移酶 (Glutathione S-transferase) 或羧酸酯酶 (Carboxylesterases) 三種常見殺蟲劑代謝酵素類群之基因做為候選基因，結果發現一種羧酸酯酶的表現量在脫芬瑞抗性品系 F5 中有明顯增加，由協力試驗 (Synergism test) 證實羧酸酯酶類群基因被抑制後會影響小菜蛾對脫芬瑞的敏感性，最後再以 dsRNA 干擾此羧酸酯酶基因表現，72 小時後與控制組相比表現量顯著降低了 4.9 倍，並在 RNA 干擾後餵食脫芬瑞，72 小時與控制組相比，干擾此羧酸酯酶表現之

小菜蛾於診斷劑量處理死亡率由 4.1% 增加至 43.8%；而以脫芬瑞對此品系 LC50 (Lethal Concentration 50%) 劑量處理死亡率由 46.9% 增加至 85.4%，證實此羧酸酯酶基因確實與小菜蛾對脫芬瑞抗性相關。

植物菌質體 PHYL1 效應蛋白干擾微型核酸調控引發花青素累積及 PHYL1 相互作用蛋白之研究

為了解決flower garden vector的問題，作者鄭涵嬪 這樣論述：

花生簇葉病菌質體 (peanut witches’ broom phytoplasma, PnWB) 感染日日春植物後，能導致植株葉片黃化、枝葉叢生，並藉由 Phyllody Symptoms1 (PHYL1) 效應蛋白引發花器葉化 (phyllody)。本實驗室在罹病日日春或 GFP-PHYL1 轉基因阿拉伯芥 (GFP-PHYL1 plant) 之葉化花 (leafy flower) 中，發現 microRNA396 (miR396) 的表現受到抑制，而受 miR396 調控的 SHORT VEGETATIVE PHASE (SVP) 則大量表現並引發花器葉化。本研究則發現 GFP-PH

YL1 plant 在六週大植株中的葉化花有花青素累積的情形，同時即時反轉錄聚合酶連鎖反應 (real time RT-PCR) 結果顯示葉化花中的花青素生合成之酵素基因的表現有明顯上調。我們推測 PHYL1 能夠誘發植物的花青素累積。我們發現 GFP-PHYL1 plant中的 miR156 表現有上升，而受 miR156 調控的 SQUAMOSA PROMOTER INDING PROTEIN-LIKE (SPL) 基因家族表現則顯著下降。SPL9 在花青素生合成中扮演負調控的角色，葉化花中 miR156 表現上升所導致的 SPL9 下降是花青素累積的成因之一。此外吉貝素 (gibbere

llic acids; GAs) 能藉由活化 SPLs 來促進開花，然而 SVP 會抑制 GAs 的生合成。在 GFP-PHYL1 plants 中，miR396 下降所導致的 SVP 過表現，使植株無法產生足夠的 GAs 來活化 SPL9，進而導致花青素累積。除此之外，本研究發現花青素在葉化花的生成與醣類的累積有關，並且蔗糖能夠促進花青素生合成相關基因的表現。另外前人研究指出 PHYL1 蛋白在植物體中的表現不穩定，我們推測可能有其他的菌質體蛋白能與之結合並幫助其穩定結構。針對感染 PnWB 日日春之葉化花進行免疫沉澱 (immunoprecipitation)，發現 PHYL1 可以和 P

nWB effector 2 (PnE2) 直接交互作用，並且藉由 PnE2 間接地與 PnWB effector 1 (PnE1) 結合。根據胺基酸序列比對以及 signal peptide 的預測，PnE1 是未被報導過的效應蛋白，PnE2 則是嵌在菌質體細胞膜表面上的優勢免疫膜蛋白 (immunodominant membrane protein)。本研究發現 PHYL1 能干擾微型核酸 (microRNA) 的表現，間接地導致花青素累積於葉化花，此外也發現 PHYL1 能與兩個菌質體蛋白結合。我們認為花青素與醣類在葉化花的累積可能有利於菌質體的生存。