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伊莉莎白菌以質譜儀鑑定之可行性與抗藥性分析

為了解決goo鑑定報告的問題，作者程雲詳 這樣論述：

伊莉莎白菌是新興的醫療照護相關機會致病菌，對多種抗生素有抗藥性，感染後可能有高死亡率。伊莉莎白菌以16S rRNA基因差異可分出三個菌種，Elizabethkingia anophelis、Elizabethkingia miricola cluster與Elizabethkingia meningoseptica。E. anophelis會造成新生兒腦膜炎、菌血症與院內群突發感染。E. miricola cluster可能造成呼吸器相關肺炎與免疫低下病患的菌血症。E. meningoseptica會引起新生兒敗血症與感染免疫低下的人。不同菌種之間的抗生素感受性可能有差異。由於臨床微生物實驗

室使用生化法或資料庫不足之質譜儀法，造成許多臨床分離伊莉莎白菌皆錯誤鑑定為E. meningoseptica。本研究目的為使用基質輔助雷射脫附離子化飛行時間質譜儀，建構質譜資料庫以正確鑑定不同的伊莉莎白菌種。另外，本研究分析不同菌種間的抗生素感受性差異，觀察感受性是否與菌種差異有關。兩醫學中心臨床菌株分別蒐集臨床報告為E. meningoseptica菌株 172與97株。第一部分為資料庫建構: 以16S rRNA基因定序作為菌種鑑定的標準方法，重新鑑定伊莉莎白菌。質譜儀使用Vitek MS RUO模式，檢體製備使用甲酸萃取與基質結晶，以Launch pad進行圖譜的擷取，以線性陽性離子模式收

集質荷比(m/z) 2,000到20,000的訊號。經過SARAMIS軟體進行結果分析、建構參考圖譜與加權圖譜，並篩選特異性訊號。以Launch pad軟體確認菌種間波峰差異。第二部分為抗生素感受性試驗分析，使用微量肉湯稀釋法，分析革蘭氏陰性菌常用之抗生素最低抑菌濃度，以臨床與實驗室標準協會指引判讀感受性。建立圖譜資料庫總共使用103株E. anophelis、21株E. miricola cluster與11株 E. meningoseptica。首先建立參考圖譜(Reference Spectra)，經過圖譜分類學分析確定參考圖譜皆為正確分類，再分析菌種特異性與菌屬共通性訊號，保留特異性訊

號，刪除共通性訊號，同時參考訊號出現頻率 (>60%)，訊號相對強度 (>1%)，保留訊號數量依前述菌種順序分別為41、39與39建立菌種共通圖譜，並且與SARAMIS資料庫內所有圖譜相比，第一個非標的物菌種的重疊訊號分別為20、18與19。給予訊號權重分別為30、33與31。建立好之加權圖譜於另一醫學中心進行未知菌之分析，以16S rRNA基因為標準方法。檢體製備使用基質直接結晶，進行加權圖譜驗證結果皆為正確。菌種間存在6個重要的高特異性訊號可分辨伊莉莎白菌種，E. anophelis為7643.7 m/z與10320.9 m/z； E. miricola cluster為3792.5 m/

z與7586.6 m/z； E. meningoseptica為3141.5 m/z與12109.1 m/z。在抗生素感受性分析結果部分，菌種間差異最顯著為levofloxacin，感受性依前述菌種順序分別17/105 (16%)、17/22 (77%)與6/11 (54.4%)，以E. anophelis的抗藥性較高 (p