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NADH與NADPH間的平衡對於大腸桿菌生產PHB的影響

為了解決hifi hr分別的問題，作者余茉天 這樣論述：

聚羥基丁酸酯（P3HB）在生物合成的過程中需要NADH和NADPH作為輔因子。大腸桿菌已被用作P3HB的異源生產模型。在我們先前的研究中，我們已成功地將pPHB01質體轉殖至Escherichia　coli，且此質體含有Caldimonas manganoxidans (C. manganoxidans) 嗜熱菌中合成P3HB的phaCAB基因。此外在還原和氧化狀態之間能進行可逆轉換的cofactor pairs對細胞至關重要，例如NAD和NADP，因為它們會在還原和氧化反應中作為電子載體。為了在P3HB生產中能平衡NADH和NADPH，我們構建了分別含有Ralstonia　eutropha

　H.16菌中paaH1、had (NADH- dependent (S)-3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenases)基因的pT7paaH1、pT7had質體，以及含有 E.coli　MG1655　(DE3)菌中UdhA(soluble transhydrogenase)基因的pRedML01質體。然後我們將不同組合的質體pPHB01 + pT7paaH1、pPHB01 + pT7had和pPHB01 + pRedML01轉殖到大腸桿菌E. coli　(DE3)中，以維持P3HB生產過程中 NAD(H) 和 NADP(H). NADH和NADPH平衡在P3HB產生中的作

用，可以通過使用尼羅藍A染色來確定，這是一種簡單方便的方法，用於確認重組大腸桿菌中是否含有PHB。使用尼羅藍A染色法對LB瓊脂進行熒光分析的結果表明，大腸桿菌BL21（DE3）/pT7PaaH1和大腸桿菌BL21（DE3）/ pT7的熒光強度均高於大腸桿菌BL21（DE3）/ pPHB01。在24至96小時內，大腸桿菌中的NADH和NADPH在P3HB生產中失衡。