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膀胱癌組織p14ARF-p53途徑與p16INK4a-Rb途徑基因變異分析
為了解決honda水箱精顏色 的問題,作者葉文婷 這樣論述:
膀胱癌在世界上是一個重要的健康問題。在過去的研究中,發現位於第九對染色體的變異在膀胱癌上是最常發生的事件。而位於第九對染色體21區之抑癌基因p16INK4a/p14ARF基因,目前已知分別循Rb及p53調控路徑,控制細胞生長週期的運行。p16INK4a基因是cyclin dependent kinase inhibitor,經由Rb路徑調控細胞生長。而p14ARF基因藉與MDM2結合而穩定p53基因避免被破壞,因此是經由p53途徑使細胞週期停滯或細胞凋亡(apoptosis)。目前許多的研究也顯示p16INK4a/ p14ARF基因的去活化與細胞癌化有關。因此,此研究目
的為分析p16INK4a及p14ARF基因在膀胱癌組織變異機制並探討同一癌組織p14ARF-p53途徑與p16-Rb途徑基因變異型式。 實驗中利用南方墨點雜交法(Southern bloting hybridization)分析基因缺失,結果顯示,53例膀胱癌組織中p16INKa基因同質結合性缺失有12例(23%), p14ARF基因同質結合性缺失有23例(43%),而且p14ARF基因缺失幾乎發生在exon 1β,佔91﹪(21/23)。exon 1β伴隨exon1α及exon 2缺失只有二例。實驗中也發現屬於分化良好及分化中等的腫瘤組織,p14ARF基因缺失只有6例(2
6%),而分化較差的腫瘤組織卻有17例(74%)。以PCR-SSCP及核酸定序分析基因突變情形,實驗結果發現只有一例(2.5﹪;1/40)腫瘤組織在exon 2有點突變,而此點突變造成p16INK4a及p14ARF missense的突變。在p16INK4a基因的突變是位於codon 108(GAT→CAT),導致氨基酸從aspartic acid變成histidine,而此位置剛好位於ankyrin repeat motifs區域上,此區域是蛋白質的結合位也是抑制CDK4的重要區域,因此,對於p16INK4a調控細胞週期的功能會有影響。而p14ARF基因的突變點是位於codon 122(CG
A→CAA),導致氨基酸從arginine轉變成proline。此外,利用甲基化專一性聚合酶連鎖反應(MSP)分析基因甲基化情形時,發現p16INK4a基因CpG island甲基化有24例(24/40;60%),但是p14ARF基因CpG island上並無發現有任何腫瘤組織有甲基化的情形。隨後利用RT-PCR檢測p16INK4a及p14ARF的mRNA的表現情形,發現有27例(55﹪)檢體,p16INK4a mRNA沒有表現,其中包含了12例基因缺失檢體及15例甲基化檢體,然而,有7例甲基化檢體可檢測到p16INK4a mRNA表現,認為可能是因只有一對偶基因甲基化所造成。另外,有28例(
57﹪)檢體沒有p14ARF mRNA的表現,其中5例並無任何基因變異存在,因此認為可能有其它機制導致p14ARF mRNA不表現。最後利用免疫組織化學染色法分析P16、P14、P53及RB蛋白質表現情形,結果顯示P14蛋白質於69﹪(27/39)膀胱癌組織不表現,而P53蛋白質不正常表現的癌組織佔69﹪(27/39),另外,實驗結果發現在同一組織中,同時伴隨P14蛋白質不表現及P53蛋白質被染色是常發生的變異型態, 佔44﹪(17/39)。另外於39例癌組織中,P16蛋白質沒有表現有25例,佔64﹪,而RB蛋白質沒有表現的組織佔9/39(23﹪),而RB蛋白質過度表現的組織佔38﹪(15/3
9)。分析結果顯示RB蛋白質不正常表現於侵犯性癌上較常見。另外,發現在同一組織中,同時具有P16及P53蛋白質異常表現的膀胱癌組織也佔44﹪(17/39)。綜合以上結果,在本研究中發現沒有任何一個膀胱癌組織同時表現正常的P14/P53與P16/RB蛋白質,表示任一種蛋白質的異常表現在腫瘤組織必定存在(100﹪)。另外,同時有p14ARF/p53與p16INK4a/Rb路徑變異的腫瘤組織也高達77﹪。因此認為,p14ARF基因的缺失及p16INK4a基因的CpG island甲基化,不但會造成抑癌基因本身的去活化外,也會影響調節細胞週期路徑下游基因p53及Rb的去活化,進而造成細胞發生癌化或加速
癌症進展。
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