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1,9-Diallyl-9H-pyrido[3,4-b]indole 藉由抑制 Src family kinases 降低嗜中性白血球發炎作用
為了解決honda cb1100rs二手 的問題,作者古翔至 這樣論述:
目錄指導教授推薦書口試委員會審定書誌謝 iii中文摘要 viAbstract viii目錄 x圖目錄 xiv縮寫表 xvi第一章 緒論 11-1. 研究動機 11-2. 人類嗜中性白血球 21-3. 嗜中性白血球發炎反應的機制 31-3-1. 呼吸爆破作用 (Respiratory burst) 31-3-2. 去顆粒化作用 (Degranulation) 41-3-3. 嗜中性白血球胞外陷阱 (Neutrophil extracellular traps, NETs) 51-4
. 嗜中性白血球相關的訊號傳遞路徑 71-4-1. Intracellular calcium (Ca2+) 71-4-2. Mitogen-activated protein kinases (MAPKs) 81-4-3. Phosphoinositide 3-kinase/Protein kinase B 91-4-4. cAMP/PKA 101-4-5. Tyrosine kinases 111-4-6. Vav-family protein 13第二章 實驗材料及方法 152-1. 實
驗材料 152-2. 實驗方法 172-2-1. 人類嗜中性白血球製備 172-2-2. 細胞存活率 172-2-3. 細胞培養 182-2-4. 超氧自由基 (Superoxide anion, O2˙-) 釋放之測定 182-2-5 彈性蛋白酶 (Elastase) 釋放測定 202-2-6 彈性蛋白酶活性測定 212-2-7 細胞毒性測試 222-2-8 直接清除自由基之能力測定 232-2-9 細胞表面 CD11b 表現量測定 232-2-10 細胞黏附 (A
dhesion) 測定 242-2-11 細胞移行 (Migration) 測定 242-2-12 嗜中性白血球胞外陷阱免疫螢光染色 252-2-13 嗜中性白血球胞外陷阱釋放螢光測定 262-2-14 Src family kinases 酵素活性測定 262-2-15 西方墨點法 (Western blot) 27第三章 實驗結果 293-1 NCKU-S-4 隨濃度梯度有效的抑制 fMLF 活化的人類嗜中性白血球超氧自由基生成 293-2 NCKU-S-4 不具有直接清除超氧自由基的能力
293-3 NCKU-S-4 隨濃度梯度有效的抑制 fMLF 活化的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶釋放 303-4 NCKU-S-4 抑制嗜中性白血球活性並非造成細胞毒性所致 303-5 NCKU-S-4 抑制在 fMLF 刺激下人類嗜中性白血球黏附和移行能力 313-6 NCKU-S-4 抑制在 fMLF 刺激下人類嗜中性白血球 CD11b 的表現 313-7 NCKU-S-4 有效的抑制以不同刺激劑活化人類嗜中性白血球的超氧自由基生成與彈性蛋白酶釋放 313-8 NCKU-S-4 不會透過 PKA 路徑抑制人類嗜中性白血球超
氧自由基生成與彈性蛋白酶釋放 333-9 NCKU-S-4 抑制在不同刺激劑作用下人類嗜中性白血球的移行 333-10 NCKU-S-4 不影響 p38 MAPK 與 JNK 磷酸化,但會些微抑制 ERK 及 AKT 的磷酸化 343-11 NCKU-S-4 抑制 Src family、Lyn 及 Hck 的磷酸化 343-12 NCKU-S-4 抑制 SFKs 下游的 Btk 與 Vav 的磷酸化 353-13 NCKU-S-4 直接抑制 Src、Fgr、Blk 以及 Yes kinase 的活性 353-14
NCKU-S-4 抑制在 PMA 誘發下 NETs 形成 36第四章 討論 37第五章 圖表 43參考文獻 72 圖目錄Figure 1. The chemical structure of NCKU-S-4. 43Figure 2. NCKU-S-4 inhibits superoxide anion generation in fMLF-stimulated neutrophils. 44Figure 3. NCKU-S-4 suppresses intracellular and extracellular
ROS generation in fMLF-activated human neutrophils using luminol-enhanced chemiluminescence assay 45Figure 4. NCKU-S-4 inhibits intracellular ROS generation in fMLF-activated neutrophils. 47Figure 5. NCKU-S-4 inhibits intracellular ROS generation in fMLF-activated neutrophils. 48Figur
e 6. NCKU-S-4 does not have the ability to scavenge superoxide anion in cell-free xanthine/xanthine oxidase system. 49Figure 7. NCKU-S-4 inhibits elastase release in fMLF-stimulated neutrophils. 50Figure 8. NCKU-S-4 does not influence elastase activity in cell-free system. 51Figure
9. NCKU-S-4 does not cause LDH release in human neutrophils. 52Figure 10. NCKU-S-4 suppresses adhesion of fMLF-activated neutrophils to bEND 3.1 cells. 53Figure 11. NCKU-S-4 suppresses the fMLF-induced human neutrophils migration. 54Figure 12. NCKU-S-4 inhibits the expressi
on of CD11b in fMLF-activated neutrophils. 55Figure 13. NCKU-S-4 significantly inhibits superoxide anion generation in different stimulators-activated neutrophils. 56Figure 14. NCKU-S-4 suppresses intracellular and extracellular ROS generation in various stimulators-activated human neutr
ophils using luminol-enhanced chemiluminescence assay. 58Figure 15. NCKU-S-4 significantly reduces elastase release in different stimulators-activated neutrophils. 60Figure 16. Effect of PKA inhibitor on the inhibition of superoxide anion generation and elastase release by NCKU-S-4. 6
2Figure 17. NCKU-S-4 suppresses the different kinds of stimulators-induced human neutrophils migration. 64Figure 18. NCKU-S-4 partially influences ERK and AKT phosphorylation but not p38 and JNK in fMLF-activated human neutrophils. 65Figure 19. NCKU-S-4 significantly exhibits inhibito
ry effect on phosphorylation of Src family, Lyn, Hck, Btk and Vav in fMLF-activated human neutrophils. 66Figure 20. NCKU-S-4 inhibits the kinase activity of Src, Fgr, Blk and Yes but not Hck, Lyn, Blk and Fyn in vitro. 68Figure 21. NCKU-S-4 decreases NETs formation in PMA-stimulated neut
rophils. 70
裁切膜蛋白預測工具與資料庫建置
為了解決honda cb1100rs二手 的問題,作者田惟升 這樣論述:
Chinese Abstract隨著越來越多癌症與疾病相關的生物標記被識別之後,生物標記的開發在生物研究和醫學診斷已成為新興的領域。由於非侵入性的生物標記,在臨床上易於取得,針對非侵入性的生物標誌進行開發已成為一個新趨勢,也因此分泌蛋白生物標記的識別一直受到高度重視。已知大多數分泌蛋白會透過傳統的分泌途徑進行蛋白分泌,然而,有些細胞膜蛋白也會透過細胞外切被釋放到細胞外環境。由於研究發現,細胞膜蛋白的細胞外切現象參與了細胞各種不同的生理和疾病的調節過程,因此,被外切並釋放到細胞外的膜蛋白或許也可成為非侵入性的生物標記的來源之一。先前關於膜蛋白的研究顯示,只有大約2%或4%細胞表面分子的會有細胞
外切的現象;因此,很顯然,不是每一個膜蛋白都會通過細胞外切被釋放至細胞外。在此種情況下,去評估一個膜蛋白是否會從細胞中被釋放,以及識別出藉由外切釋放到細胞外並具有臨床應用潛力的膜蛋白標記,已經是重要不可或缺的。本篇論文研究首先開發出一個計算模型產生的分類工具ShedP,用以預測膜蛋白的細胞外切的現象。當ShedP與其他目前已存在的預測工具整合,我們建立了一個篩選的工具平台SecretePipe,能夠同時預測具有信號胜肽的非膜蛋白類型的分泌蛋白質和預測會藉由細胞外切現象而從細胞中被釋放的膜蛋白。我們的結果顯示,藉由整合了ShedP,SecretePipe預測分泌蛋白數據的結果勝過其他當前最先進的
預測工具。因為具備了預測膜蛋白細胞外切的能力,SecretePipe預測膜蛋白釋放至細胞外的預測能力比其他預測工具更好,也增強了SecretePipe在識別非侵入性的生物標記上應用的潛力。此外,在論文研究中也建構了關於細胞外切膜蛋白的資料庫SheddomeDB。藉由收集在公開文獻中已被證實具有細胞外切現象的膜蛋白,SheddomeDB可供生物研究和臨床人員研究查詢目前已知具有細胞外切現象的膜蛋白。 從445關於膜蛋白細胞外切研究文獻中,收錄了401個經過驗證會經由細胞外切而釋放至細胞外的膜蛋白,其中199膜蛋白尚未被已知的資料庫標註或驗證。 SheddomeDB試圖針對細胞外切膜蛋白提供全面性
的的資訊,包括膜蛋白外切機制調控和相關的功能或疾病。 SheddomeDB資料庫可用於幫助識別找出可作為生物標誌的細胞外切膜蛋白,並幫助了解膜蛋白細胞外切的生理和病理過程中的調控作用。因此,當越來越多膜蛋白被發現藉由細胞外切的方式被釋放至細胞外,並且越來越多的研究揭示膜蛋白細胞外切參與各種過程和病理調節的作用,去識別因細胞外切而釋放的膜蛋白已成為非侵入性生物標記開發和sheddome蛋白質體學領域重要不可或缺的。為了幫助在膜蛋白細胞外切的研究並提供細胞生物學家和臨床研究人員提供了有用的資料庫資源,在本篇的論文研究提供了兩個生物資訊學的專案工具。首先,整合細胞外切預測工具ShedP的平台Secr
etePipe有助於評估一個未知的或未記錄膜蛋白被切割並從細胞釋放的可能性。接著,SheddomeDB資料庫整理出目前已知存在經過實驗驗證的細胞外切膜蛋白。這兩種設計研究已可公開並利用以下的網址使用查詢 http://bal.ym.edu.tw/SecretePipe/ 以及http://bal.ym.edu.tw/SheddomeDB/.
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