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類薑黃素在B16-F10細胞株與斑馬魚系統中影響黑色素生成之分子研究

為了解決hypopigmentation中文的問題，作者王冠蓉 這樣論述：

黑色素 (melanin) 主要分布於皮膚表皮 (epidermis) 的基底層 (stratum basale)，用於吸收陽光中的紫外線以及有害的自由基，黑色素是由黑色素細胞 (melanocytes) 進行黑色素生成作用 (melanogenesis) 而產生，若黑色素產生過量或不足會造成皮膚色素異常症 (pigmentation disorders)，當皮膚的黑色素過度產生或異常的累積就會形成黑色素過度沉著症 (hyperpigmentation)；反之黑色素過度的減少就會形成黑色素不足症 (hypopigmentation)。酪胺酸酶 (tyrosinase) 為黑色素生成作用的重要

酵素，已知酪胺酸酶抑制劑可使用於美白劑或治療黑色素過度沉著症，因此研究開發具有調節黑色素生成作用的化合物，將可應用於化妝品美白劑或皮膚色素異常症的治療。已知植化素 (phytochemicals) 具有許多生物活性，本論文的第一個研究目的為利用酪胺酸酶啟動子 (tyrosinase promoter) 篩選具有調節黑色素生成作用的植化素。首先將 tyrosinase promoter- luciferase reporter plasmid 轉染至黑色素瘤細胞株 B16-F10 細胞，篩選具有調節 promoter 活性的植化素，結果發現有 5 種植化素抑制酪胺酸酶啟動子活性，5 種植化素活化

酪胺酸酶啟動子活性。此外，我們也成功建立了具有酪胺酸酶啟動子活性之穩定表達細胞株 (stable cell line)，並且從中篩選具有顯著抑制酪胺酸酶啟動子活性的植化素薑黃素 (curcumin)、去甲氧基薑黃素 (demethoxycurcumin, DMC)、二去甲氧基薑黃素 (bisdemethoxycurcumin, BDMC)進行後續的研究。類薑黃素 (Curcuminoids) 來自於薑黃植物 (Curcuma longa) 根莖部萃取的化合物，由 curcumin、DMC、BDMC 三種主要成分所組成，已有許多研究指出類薑黃素具有抗氧化、抗發炎、抗腫瘤的功效。本論文第二個研究目

的為探討類薑黃素對於黑色素生成作用的影響以及參與其中的分子機制。首先探討類薑黃素是否造成 B16-F10 細胞毒性，從結果顯示curcumin (0~10 μM)、 DMC (0~20 μM)、BDMC (0~20 μM) 不會對 B16-F10 細胞造成毒性。接著探討類薑黃素對於黑色素生成之影響，從結果證實 curcumin、DMC、BDMC 會減少細胞內產生黑色素，也使得分泌至細胞外的黑色素含量降低，我們也發現 curcumin、DMC、BDMC 也具有抑制 α-Melanocyte-Stimulating Hormone (α-MSH) 誘導黑色素生成的功效，由上述結果顯示類薑黃素可抑制

黑色素生成作用。我們進一步探討類薑黃素是否會影響酪胺酸酶酵素活性，在in vitro tyrosinase activity實驗結果中發現 curcumin、DMC、BDMC 皆能有效抑制酪胺酸酶酵素的活性。此外，我們也發現 curcumin、DMC、BDMC 會降低酪胺酸酶、tyrosinase-related protein 1 (TYRP1)、tyrosinase-related protein 2 (TYRP2) 等參與黑色素生成作用重要酵素 mRNA 表達量，也降低了參與黑色素生成作用重要轉錄因子 MITF mRNA 的表達量。上述實驗結果顯示，類薑黃素可能藉由抑制酪胺酸酶活性以及黑

色素生成作用中關鍵酵素之基因表達，進而降低黑色素生成。最後本論文利用斑馬魚動物模式探討類薑黃素在in vivo系統中對黑色素生成作用之影響，從實驗結果證實 curcumin、DMC 與 BDMC 皆能有效減少斑馬魚胚胎黑色素生成。本論文的研究結果除了建立可以篩選調節酪胺酸酶活性的平台，也證明了類薑黃素在黑色素細胞瘤 B16-F10 細胞以及斑馬魚動物實驗，皆可有效減少黑色素，curcumin、DMC 與 BDMC 為黑色素生成作用抑制劑，未來將可應用於皮膚美白化妝品或藥物，預防或治療皮膚黑色素異常疾病。

三合一美白劑抑制黑色素生成機制與綜效之探討

為了解決hypopigmentation中文的問題，作者李嘉欣 這樣論述：

謝誌 III中文摘要 IV英文摘要 (ABSTRACT) V目錄 VI圖目錄 XI表目錄 XIV縮寫表 XV第壹章　前言 - 1 -前言 - 2 -第貳章　文獻探討 - 4 -第 2-1 節 皮膚 - 5 -2-1-1. 皮膚簡介 - 5 -2-1-2. 皮膚結構 - 5 -第 2-2 節 黑色素 - 8 -2-2-1. 黑色素簡介 - 8 -2-2-2. 黑色素小體 (Melanosome) - 8 -2-2-3. 酪胺酸酶 - 9 -2-2-4. 黑色素小體轉移機制 - 10 -2-2-5. 色素沉著機制 - 11 -第 2-3 節 細胞自噬 -

13 -2-3-1. 細胞自噬 - 13 -2-3-2. 細胞自噬與色素沉著 - 15 -2-4-1. 斑馬魚簡介 - 16 -2-4-2. 斑馬魚生長發育 - 16 -2-4-3. 斑馬魚與色素沉著 - 18 -2-4-4. 斑馬魚的美白試驗 - 19 -2-4-5. 苯硫脲與刺激素對斑馬魚的作用 - 19 -2-4-6. 環境與斑馬魚發育時期對黑色素生成的影響 - 20 -第2-5節. 三合一美白劑 - 21 -2-5-1. Zer - 21 -2-5-2. Pt - 21 -2-5-3. AT - 22 -第參章　研究動機與目的 - 23 -第 3-1 節 研究

動機 - 24 -第 3-2 節 實驗目的 - 26 -第 3-3 節 實驗架構 - 27 -第肆章　實驗材料與方法 - 28 -第 4-1 節 實驗材料 - 29 -第 4-2 節 實驗儀器 - 37 -第 4-3 節 實驗方法 - 39 -4-3-1. 細胞培養 (Cell culture) - 39 -4-3-2. 活化細胞 - 41 -4-3-3. 繼代培養 - 41 -4-3-4. 冷凍細胞 - 42 -4-3-5. 細胞存活率測定 (Cell viability) - 42 -4-3-6. 細胞總蛋白質萃取 (Total protein extraction

) - 43 -4-3-7. 蛋白質定量 (Protein quantitive analysis) - 45 -4-3-8. 西方墨點法 (Western blotting) - 48 -4-3-9. 免疫螢光染色 (Immunofluorescence) - 54 -4-3-10. 酪胺酸酶活性測定(Tyrosinase activity Assay) - 56 -4-3-11. 黑色素含量測定(Melanin concentration Assay) - 58 -4-3-12. 斑馬魚飼養 (Zebrafish stocks and husbandry) - 59 -4-3

-13. 斑馬魚酪胺酸酶活性及黑色素含量測定 (Tyrosinase activity and melanin contents of zebrafish) - 61 -4-3-14. 穿透式電子顯微鏡(Transmission Electron Microscopy, TEM) - 64 -第伍章　實驗結果與圖表 - 69 -第5-1節 三合一美白劑抑制黑色素B16F10細胞黑色素生成 - 70 -5-1-1. 三合一美白劑與其成分混搭對黑色素B16F10細胞抑制酪胺酸酶及斑馬魚美白表現 - 70 -5-1-2. 三合一美白劑對 B16F10 細胞的細胞毒性影響 - 70 -5-

1-3. 三合一美白劑抑制α-MSH誘導B16F10細胞生成酪胺酸酶及相關蛋白表現之影響 - 71 -5-1-4. 三合一美白劑抑制α-MSH誘導B16F10 細胞生成MITF的表現 - 71 -5-1-5. 三合一美白劑藉由調控上游訊息cAMP/CREB蛋白表現來抑制B16F10 細胞黑色素生成 - 72 -5-1-6. 三合一美白劑抑制 α-MSH 誘導 B16F10 細胞黑色素生合成 - 72 -5-2-1. 三合一美白劑通過自噬作用抑制黑色素相關蛋白與黑色素生成 - 83 -5-2-2. 三合一美白劑經由MAPK及PI3K/AKT、PKC、m-TOR促進自噬相關蛋白表現量

- 84 -5-2-3. 三合一美白劑是否能經由細胞自噬作用來抑制Melanin生成 - 85 -5-2-4.　三合一美白劑抑制斑馬魚黑色素生合成 - 86 -第陸章　討論 - 99 -第6-1節　三合一美白劑抑制α-MSH誘導B16F10 細胞生成Tyrosinase及MITF相關蛋白的表現 - 100 -第6-2節　三合一美白劑藉由調控上游訊息cAMP/CREB蛋白表現來抑制B16F10 細胞黑色素生成 - 100 -第6-3節　三合一美白劑能促進自噬相關蛋白表現量 - 100 -第6-4節　三合一美白劑經由MAPK及PI3K/AKT、PKC、m-TOR促進自噬相關蛋白表現量

- 101 -第6-5節　三合一美白劑經由細胞自噬作用來抑制Melanin生成 - 101 -第6-6節　三合一美白劑能抑制斑馬魚黑色素生成 - 102 -第柒章　結論 - 103 -第7-1節 三合一美白劑抑制 α-MSH 誘導B16F10細胞生成黑色素 - 104 -第7-2節 三合一美白劑透過自噬抑制B16F10細胞生成黑色素 - 105 -第捌章　參考資料 - 106 -