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Pantoea stewartii中pSW200 維持穩定性的機制

為了解決lb/in2 psi的問題，作者巫盈忠 這樣論述：

Pantoea stewartii SW2 含有13個質體，而 pSW200 是其中之ㄧ，並且在 pSW200 與 ColE1 的複製起始區域具有高度相似性，因此屬於 ColE1 類質體。質體穩定性結果發現 pSW200 可以在 Escherichia coli HB101中穩定存在，並估計質體數為13。本研究發現 pSW200 的 RNAII 啟動子 -35 上游之9個鹼基對，5’-AAGATCTTC，具 UP element 遠端次單位功能。融合轉錄質體和試管體外 RNAII 合成實驗，結果顯示當9個鹼基對同時刪除後造成 RNAII 啟動子轉錄活性降低78%與 RNAII 合成量也大幅降

低。相同的突變造成 pSW200 的突變株之質體數由13降低至5，質體穩定性也大幅降低。發現在 ColE1 也包含相似的序列，5’-AGGATCTTC，將 pYCW301 也發生同樣的突變，則 pYCW301M 的平均質體數由34下降至16。若將 5’-AAGATCTTC 插入 pYCW302，則可使得質體數由12增加至28。另外，pSW142KW 是 pSW100 的衍生質體，是一個不穩定的質體，但是嵌入 5’-AAGATCTTC 則可增加質體穩定性與質體數，顯示此序列對於維持質體穩定性非常的重要。總結 RNA polymerase 的 α 次單位結合於 RNAII 啟動子 -35 上游的

9個鹼基對序列，對 ColE1 類質體的 RNAII 合成之效率與質體穩定性的維持有其必要性。ColE1 的 RNAII 啟動子包含三個可被甲基化的 5’-GATC 序列，而其中的 -43 和 -32 也可以在 pSW200 中發現。從融合轉錄質體的研究發現將 -43 的序列置換成 5’-AATC，並不會影響 RNAII 啟動子的活性與質體的穩定性，這樣的結果顯示 -43 位置可甲基化的 5’-GATC 對 RNAII 的合成可能並不重要。

不同壓力與氣體對於裸鼠皮膚的穿透影響

為了解決lb/in2 psi的問題，作者吳秉峰 這樣論述：

＜　中　文　摘　要　＞ 　　藥物穿皮輸送系統主要被皮膚最外層的低穿透性之角質層所限 制，目前被廣泛地研究如何克服這層屏障，包括了使chemical enhancers，iontophoresis，electroporation以及sonophoresis等方法．而本實驗的主要目的是利用不同的壓力，氣體及處理時間探討裸鼠皮膚的穿透機制及影響．使用的壓力分別是5，7.5，10或12.5 lb/in2，並以氮氣與氧氣 (95% O2+5%CO2)，分別給與30秒，60秒或90秒，處 理後，檢測小分子螢光性物質 (Flu

orescein Isothiocyanate (FITC) Isomer I (Mw 332)與Pyrene (Mw 202))與大分子物質 (胰島素 (Mw 5500))，來進行體外穿透實驗．此外，利用粒徑0.046, 0.11, 0.5與2.0 μm具螢光的Latex beads，，探討壓力對於皮膚孔徑大小的影響，觀 察組織切片，皮膚電阻測試，掃描式與穿透式電子顯微鏡下結構的變 化；另外使用傅立葉變換紅外光譜儀，差式掃瞄熱量分析儀，蛋白質 定量分析法觀察氮氣與氧氣對於皮

膚組織脂肪與蛋白質組成之影響． 　　實驗結果顯示，增加藥物穿透的主要機制是由於角質層上的孔 洞形成．在FITC小分子穿透，控制組與實驗組以12.5 lb/in2, 90秒， 氮氣處理後，最有顯著差異；二組的擬穿透係數分別為4.65±0.45´ 10-7 cm/sec與7.24±0.77´ 10-7 cm/sec cm/sec；在Pyrene方面，則為372.02±27.28´ 10-7 cm/sec與490.92±50.05 ´ 10-7 cm/sec．另外在經氧氣處理後，在FITC方面，控制組與實驗組的穿透係數分

別為4.47±0.22´10-7 cm/sec與5.55±0.87´ 10-7 cm/sec，而在Pyrene方面，則為299.68±19.26´ 10-7 cm/sec與374.83±32.07´ 10-7 cm/sec．在皮膚電阻測試方面，經由氮氣與氧氣處理過後呈現明顯減少，其中以氮氣具有顯著差異．另外在latex beads的穿透實驗上，經由氮氣與氧氣處理過後的皮膚，四種不同大小顆粒皆能有效地增加穿透．藉由組織切片得知，氮氣對於皮膚組織之Langerhans cell有增加趨勢，氧氣則無；但是氧氣對於皮膚真皮層細胞則觀察到有增生的現象．從傅立葉變換紅外光譜儀數據得知，實驗組在1550,

1454 cm-1的吸收峰有明顯減少；由差式掃瞄熱量分析得知，控制組與實驗組的相轉移溫度分別為61.74與59.61 °C； 在蛋白質含量分析上，控制組的蛋白質含量有從208.74減少至159.60 mg/ml；在皮膚水份含量上，控制組與實驗組水份含量分別為40.03與 38.23 %，皆具有統計上的差異 (p