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使用極致液相層析/串聯式質譜術定量尿液及血清中的環境污染物

為了解決lc500二手的問題，作者夏瑞敏 這樣論述：

全氟烷基化合物(perfluoroalkyl substances, PFASs)，鄰苯二甲酸酯(phthalate esters, PAEs)，雙酚A(bisphenol A, BPA)是普遍存在的內分泌干擾化學物質，可能影響野生動物和人類健康。雙酚F(bisphenol F, BPF)和雙酚S(bisphenol S, BPS)是BPA的替代物；然而，研究顯示它們的潛在危害並不亞於BPA。對羥基苯甲酸酯防腐劑(parabens)通常添加到個人保健產品、食品和藥品中，以抑制微生物生長和延長產品保存期限，但是其亦屬內分泌干擾化學物質。食物為一般大眾暴露化學物質的主要來源，雖然台灣目前有國民膳

食營養調查，但較少生物檢體的內在劑量資料，為了評估人體暴露於這些化學物質的內在劑量，生物偵測是一種很好的方法。血清中化學物質濃度與身體內總量保持平衡；尿液則可顯示短時間經由人體代謝途徑濃度之情形。本研究使用尿液和血清做為生物基質，可以更全面的代表化學物在人體之內在劑量。本研究針對尿液及血清中11種全氟烷基化合物(PFASs)、6種鄰苯二甲酸酯代謝物(PAE metabolites)、4種防腐劑(parabens)、雙酚A(BPA)、雙酚F(BPF)及雙酚S(BPS)，完成儀器分析方法開發，使用Waters UPLC I-Class極致液相層析搭配Waters Xevo TQ-XS串聯式質譜儀，

游離介面為負電灑游離。11種全氟碳化合物(PFASs)、6種鄰苯二甲酸酯代謝物(PAE metabolites)、4種防腐劑(paraben)、雙酚S(BPS)使用之液相層析管柱為Waters CORTECS (30 × 2.1 mm, 1.6 μm)，有機動相為甲醇，水性動相為0.1% 醋酸水溶液(pH 3.26)，採梯度流析，流速為0.40 mL/min，管柱溫度為40°C，層析時間（連同管柱再平衡）為10分鐘；雙酚A(BPA) 及雙酚F(BPF)則使用Waters BEH C18 層析管柱(50 × 2.1 mm, 1.7 μm)，有機動相為甲醇，水性動相為10 mM N-甲基嗎啡林水溶

液(pH 9.65)，採梯度流析，流速為0.40 mL/min，管柱溫度為40°C，層析時間(連同管柱再平衡)為6.3分鐘。質譜儀以MRM多重反應偵測模式進行離子監測。製作標準品校正回歸線之線性範圍為0.5-500 ng/mL，線性相關係數平方r2皆為0.990以上，儀器偵測極限範圍為0.44-899 fg及儀器定量極限範圍為4.38-1024 fg，具有良好的偵測靈敏度。本研究開發尿液的樣本前處理的方法，使用β-glucuronidase 與 arylsulfatase (ALS) 兩種混合之酵素於37°C培養40分鐘，用於切斷接合物(conjugates)，並以Sirocco 96-wel

l plate進行萃取，偵測尿液中化學物質之總濃度(free plus deconjugates)，並進行方法之確效。血清前處理方法為應用實驗室先前開發之方法，使用Ostro 96-well plate進行萃取，因增加待測物種類，故一樣進行方法確效。PFASs、PAE代謝物、BPA及其替代物和Parabens在尿液方法之基質效應和萃取效率範圍分別為62-107%和92-117%。血清之基質效應和萃取效率範圍分別為88-125%、65-109%。同日和異日差異之定量偏差和相對偏差多數小於20%。尿液中的每個待測物之定性極限範圍為1.87-247 pg/mL，定量極限範圍為5.95-868 ng/

mL；血清中的每個化合物之定性極限範圍為4.14-621 pg/mL，定量極限範圍為11.1-1719 pg/mL，顯示開發之方法有良好的靈敏度。隨後應用開發之方法進行真實樣本分析。樣本來自於台大醫院兒童(National Taiwan University Children Hospital, NTUCH)於2018年2月至11月期間收集之336個配對的尿液和血清樣本，在尿液樣本的方面，因缺少一個creatinie濃度資料故尿液最終樣本數為335個。短碳鏈的PFASs (除PFPeA)、PAE代謝物、BPA及其替代物和Parabens類在尿液中均有很高的陽性率(80-100%)；短碳和長碳之

PFASs、PAE代謝物(除MBzP)、BPS和methyl、propyl parabent在血清有很高的偵測頻率(93-100%)。Methyl paraben在兩個基質皆有很高的檢出率(100%和97%)以及相對paraben類中的其他待測物有較高的幾何平均濃度(43.1 μg/g cr and 2.17 ng/mL)。最後將濃度資料＜LOQ，但＞LOD之數值，以1/2 LOQ計算；＜LOD之數值一樣以1/2 LOQ計算。刪去沒有問卷之樣本數，以濃度資料和問卷進行配對後，分別為318個尿液樣本和319個血清樣本，搭配問卷資料與飲食調查之複回歸分析，並訂定p-value