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高靈敏度醣化血紅素(HbA1c)快速酵素檢測研究

為了解決m mm換算的問題，作者周泰成 這樣論述：

醣化血紅素(Glycated Hemoglobin)的濃度與血糖的控制有非常緊密的關聯性，是監控糖尿病患者血糖值的一個重要指標，醣化血紅素中又以HbA1c (Hemoglobin A1c)含量最高，由於一般紅血球平均壽命約為120天，因此血中HbA1c的濃度可以反映出體內最近2-3個月的血糖控制情況，因此是糖尿病患者的重要血糖指標。本論文的主要目的是要開發出一能簡易快速偵測血中HbA1c的方法，所利用的偵測原理是以醣化胜肽氧化酶 (fructosyl peptide oxidase, FPO)氧化經蛋白水解酵素水解HbA1c所產生的醣化胜肽 (fructosyl valyl histidin

e, fructosyl dipeptide, FVH) 而產生之H2O2，再利用過氧化酶(horseradish peroxidase, HRP)催化呈色劑呈色，藉由呈色的深淺來推算出檢體中HbA1c的濃度。本論文先以化學合成之FPO基質醣化胺基酸 (fructosyl valine, FV)加入標準品中，來模擬檢體中不同濃度的HbA1c，探討最終反應產物H2O2之酵素反應呈色劑DA-67的呈色靈敏度，發現其可偵測標準品內FV範圍為0.002 mM~0.01 mM，換算成HbA1c濃度約為4.57%~18.30%，已可滿足一般糖尿病患者之HbA1c濃度範圍。而為改善之前使用蛋白水解酶需要長時

間、高溫才能有效水解HbA1c的方式，已找出可以在短時間內以37 oC下有效水解HbA1c的蛋白水解酶與其水解之最佳操作條件。結合呈色劑DA-67、最佳之蛋白酶、與之前實驗室所開發之基因改質FPOX酵素，本論文已成功開發出一套能用酵素呈色達到操作方便且快速檢測標準品中HbA1c含量的方法，可以在8分鐘之內完成檢測，標準品中HbA1c的濃度，偵測線性範圍為5.7%~12.2%之HbA1c濃度。