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國立成功大學 生命科學系 李純純所指導 高詠晟的 以酵母菌雙雜交系統鑑定與 BIG1 相互作用的蛋白質 (2015),提出map5 205/55r16關鍵因素是什麼,來自於鳥糞嘌呤核苷酸交換因子1、微管相聯蛋白1B、微管。

而第二篇論文國立交通大學 分子醫學與生物工程研究所 黃兆祺所指導 高君瑋的 初代背根神經節神經細胞於植物化學素及奈米鑽石研究之應用 (2012),提出因為有 初代背根神經節神經細胞、薑黃素、螢光奈米鑽石的重點而找出了 map5 205/55r16的解答。

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以酵母菌雙雜交系統鑑定與 BIG1 相互作用的蛋白質

為了解決map5 205/55r16的問題,作者高詠晟 這樣論述:

小分子鳥糞嘌呤核苷酸結合蛋白質 (small GTPase) 腺嘌呤核苷二磷酸核糖化因子 (ADP-ribosylation factors; Arfs)是一個約 20-kDa 的蛋白質,Arf 主要負責調控並參與胞內囊泡運輸的路徑,Arf 如同 Small GTPase 能夠被他們的調控蛋白質鳥糞嘌呤核苷酸交換因子 (guanine nucleotide-exchange factors, GEF)上的 Sec7 功能域催活,使得失活態的 Arf (結合 GDP)轉換為活化態的 Arf (轉為結合 GTP)。鳥糞嘌呤核苷酸交換因子 BIG1 和 BIG2 (brefeldin A-inhi

bitedguanine nucleotide-exchange factors, BIG),最初是在小牛腦組織內約 670 kDa 的蛋白質複合物中被發現的,在 BIG1 和 BIG2 主要負責催活 Arf 的 Sec7 功能域上有著高達 90%的 identity,除了 Sec7 功能域外,其他幾個在 N 端及 C 端的保守功能域的功能都鮮為人知。因此,我們透過酵母菌雙雜交系統,並利用BIG1NSec7 (a.a. 1-885,包含 Sec7 domain) and BIG1C (a.a. 886-1849)當作誘餌蛋白質與人類胚胎大腦 cDNA 庫進行交互作用的篩選。本實驗發現了多個候選

蛋白質,包括了微管相聯蛋白質 1B ( microtubule-associated protein 1B, MAP1B)的輕鏈(light chain 1, LC1)與 α-tubulin 等和微管組成相關的蛋白質;進一步利用酵母菌雜交研究出 MAP1B-LC1、α-tubulin 與 BIG1 交互作用的胺基酸序列,MAP1B-LC1與BIG1的Sec7功能域有專一性的交互作用,而α-tubulin與BIG1N端片段有交互作用,與 Sec7 域則無。微管結構的組成中,α-tubulin 便是其主要的聚合物之一,而 MAP1B 也多次被研究發現與微管的發展、穩定相關,並在神經細胞的軸突發育延

伸、神經細胞遷移扮演重要角色。我們希望能透過這些新的交互作用的發現,在未來能更加明白 BIG1 如何調控廣範圍、長距離的胞內運輸等生理機制。

初代背根神經節神經細胞於植物化學素及奈米鑽石研究之應用

為了解決map5 205/55r16的問題,作者高君瑋 這樣論述:

初代培養分離性神經細胞 (primary dissociated neuron culture) 是一個已經被廣為使用且強而有力的研究工具。雖然有很多其他較易取得的系統可供使用,且這些系統也都可以長出神經突狀的突出 (neurite-like protrusion);例如像是神經母細胞瘤 (Neuro-2a)、誘導性嗜鉻細胞瘤神經 (PC12) 與胚胎瘤細胞分化的神經 (P19),但是因為這些系統所表現的特性都無法完全涵蓋真正神經細胞的特性,因此建立一個初代神經培養系統是必要的。而我們選擇了初代背根神經節神經細胞 (primary dorsal root ganglion neuro

n culture) 作為此研究的主軸。初代背根神經節神經細胞擁有神經突生長快速、屬於周邊神經系統與神經突可再生等特性。在此研究中,我們專注於研究初代背根神經節細胞於植物化學素 (phytochemical) 及奈米鑽石 (nanodiamond) 之應用。 薑黃素是一種植物化學素,目前已知具有對抗多種疾病的潛力,例如:阿茲海默症與帕金森氏症。先前的研究顯示以神經生長因子誘導的PC12神經 (NGF-induced PC12 neurons) 為實驗材料,薑黃素會造成劑量相關性的神經突伸長。但是在促神經基因Ascl1 誘導的P19 神經 (proneural gene Ascl1-ind

uced P19 neurons) 中卻造成神經突有劑量相關性的縮短。我們認為PC12與P19這兩種細胞產生的神經突對於薑黃素有相反的表現型,可能源自於周邊神經系統與中樞神經系統本質上的差異。在本實驗中,我們發現薑黃素對於初代背根神經節神經細胞的神經突生長以及細胞存活率沒有明顯的影響,但是對於初代皮層神經細胞 (primary cortical neurons) 的神經突生長及細胞存活率有劇烈的抑制效果。這些結果顯示薑黃素確實在不同神經系統具有不同的作用,但是確切原因需待進一步的查證。 近年來,螢光奈米鑽石 (fluorescent nanodiamond) 是一個非常受到矚目的奈米材料

,因為其具有奈米級大小及所發出的螢光不會有光漂白現象,因此非常有潛力能夠發展成為生物探針。在本研究中,我們使用初代背根神經節神經細胞當作素材,進行奈米螢光鑽石的毒性測試,發現並不會對神經細胞的存活率造成影響,但是神經突的生長受到抑制。在活細胞影像實驗中,可以觀察到神經突的生長錐 (growth cone) 在碰觸到奈米螢光鑽石顆粒的時候,有退縮或轉向的現象,因此我們推論,神經突的縮短是因為奈米螢光鑽石的空間障礙所造成。