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國立臺灣大學 漁業科學研究所 張繼堯所指導 陳建文的 石斑魚病毒之分子學研究：乙型野田病毒線性B細胞抗原決定區與虹彩病毒抗細胞凋亡CARD蛋白 （2014），提出qx50 2023菜單關鍵因素是什麼，來自於乙型野田病毒、抗原決定區、胜肽、單株抗體、龍膽石斑、神經壞死病毒、胜肽進入抑制劑、細胞凋亡、半胱胺酸蛋白酶聚集功能區、石斑魚、虹彩病毒、半胱胺酸蛋白酶。
而第二篇論文國立臺灣大學 微生物學研究所 葉秀慧所指導 陳柏任的 肝癌形成早期雄激素路徑促進微核醣核酸-216a之轉錄進而降低抑癌基因TSLC1表現之研究 （2011），提出因為有 微核醣核酸-216a、雄激素的重點而找出了 qx50 2023菜單的解答。
石斑魚病毒之分子學研究：乙型野田病毒線性B細胞抗原決定區與虹彩病毒抗細胞凋亡CARD蛋白
為了解決qx50 2023菜單 的問題，作者陳建文 這樣論述：
乙型野田病毒為引起多種重要海水養殖魚種病毒性神經壞死症的感染原，其感染結果導致全球性的海水魚苗高死亡率。外套蛋白是乙型野田病毒唯一的結構蛋白，具有自行組裝成病毒顆粒的能力。本研究利用一株具有高效價中和能力的單株抗體，RG-M18，來辨識病毒外套蛋白上的線性B細胞抗原決定區。分析一系列大腸桿菌/PET表現系統生產的重組蛋白後，證實RG-M18單株抗體辨識的線性抗原決定區位於此病毒外套蛋白C端介於胺基酸殘基195至338之間，另用一套重疊的人工胜肽被合成來評估對RG-M18單株抗體的結合能力，以確認最小的抗原決定區範圍，分析辨識出195VNVSVLCR202為最小的抗原決定區範圍。利用點漬矩陣和
酵素免疫分析法來對比分析這個抗原決定區的丙胺酸掃描突變，結果顯示纈胺酸197，纈胺酸199和半胱胺酸201為抗體結合關鍵性的胺基酸。若將RGNNV，BFNNV和TPNNV基因型病毒上的白胺酸200替換成SJNNV基因型上的甲硫胺酸200並不會影響結合親和力，推測RGM18單株抗體可以辨識乙型野田病毒屬的所有病毒基因型。由競爭實驗的結果顯示此抗原決定區的合成多抗原胜肽具有完全抑制龍膽石斑神經壞死病毒在石斑腦細胞株中的繁殖能力。這些研究結果提供了這株中和性單株抗體新的保護機制，並對乙型野田病毒的疫苗學和胜肽藥物開發具有更寬廣的含意。在虹彩病毒CARD蛋白的抗細胞凋亡研究方面：石斑魚虹彩病毒(GIV
)屬於虹彩病毒科、Ranavirus屬,而此病毒科之基因體皆包含了一個具有抗細胞凋亡功能的半胱胺酸蛋白酶聚集功能區基因(caspase recruitment domain, CARD)。石斑魚虹彩病毒之CARD基因可轉錄出91個胺基酸、分子量為10.505 KDa的蛋白,且此蛋白與人類ICEBERG還有其他的病毒所帶有的CARD蛋白高度相似。在本論文中利用北方墨點法證明GIV-CARD於感染細胞後4小時開始轉錄;另一方面，其轉錄完全被cycloheximide所抑制，而非aphidicolin，結果顯示GIV-CARD是一個早期基因。在細胞中的GIV-CARD-EGFP與GIV-CARD-F
LAG重組蛋白，可觀察到重組蛋白皆會從細胞質進入細胞核，但在GIV-CARD蛋白上並沒有明顯的核定位序列。在感染GIV的石斑腎臟細胞株中利用RNA干擾技術抑制GIV-CARD的表現量亦可發現同時在早期感染階段也降低其他五個病毒基因的表現量，並且也降低了石斑魚虹彩病毒感染的能力。免疫螢光染色法顯示細胞中所表現的GIV-CARD重組蛋白有效的抑制細胞凋亡的發生。 HeLa細胞經由UV照射或使用anti-Fas抗體處理後分別誘發內在途徑和外在途徑的細胞凋亡。然而，過度表現的重組GIV-CARD蛋白可在HeLa細胞中分別抑制經由粒線體及死亡受體訊號傳遞下的細胞凋亡。最後在本論文提出在HeLa細胞中所表
現的GIV-CARD重組蛋白顯著降低經由anti-Fas抗體所誘發的caspase-8和-9的活性。總結而言，這些結果顯示GIV-CARD通過內在途徑和外在途徑抑制細胞凋亡。
肝癌形成早期雄激素路徑促進微核醣核酸-216a之轉錄進而降低抑癌基因TSLC1表現之研究
為了解決qx50 2023菜單 的問題，作者陳柏任 這樣論述：
microRNA 可能在癌症中扮演類似致癌基因或是腫瘤抑制基因的重要角色， 而在肝癌 (Hepatocellular carcinoma；HCC) 中也已經發現許多表現異常的 microRNA， 但是在肝癌形成的早期過程， 是否就有 microRNA 變異參與在其中卻很少被探討。 本研究利用肝癌鄰近的非腫瘤組織當作癌症前期組織， 藉著 Real-Time PCR 分析 22 個與 HCC 相關的 microRNA 後， 結果發現 miR-216a 和 miR-224 的表現量在癌症前期就開始異常上升， 其中 miR-216a 的上升現象在男性病患尤其顯著。 後續針對 miR-216a 進行研
究性別差異的原因， 結果發現雄激素訊息傳遞路徑會促進肝癌細胞內生性的 pri-miR-216a 表現量， 而且此現象在 B 型肝炎病毒的 X 蛋白 (HBx) 存在下會更加明顯。利用 5’ RACE 找出 pri-miR-216a 5’ 上游可能之轉錄起始位置 (Transcriptional Starting Site；TSS)， 針對此 TSS 構築數個包含 TSS 上游不同長度之 reporter 質體， 界定 TSS 上游 –603 到 –304 bp 之基因片段為接受雄激素調控之區域。 進一步利用點突變的實驗確認 –349 到 –335 bp 之間的雄激素反應序列 (androgen
response element；ARE) 是 AR 調控轉錄的重要關鍵位置。 之後利用染色質免疫沉澱分析 (Chromatin immunoprecipitation；ChIP) 進一步證實受 ligand 刺激的 AR 的確會與 promoter 上的這個 ARE 作結合， 進而去促進 miR-216a 的轉錄。除了 miR-216a 的上游調控機轉發現外， 我們也發現 miR-216a 會與 TSLC1 抑癌基因的 3’ 端未轉譯區 (3’ untranslated region；3’ UTR) 結合而降低 TSLC1 蛋白質的表現， 進而去促進肝細胞的增生和遷移之活性。 最後分析臨床
上男性病患的肝臟組織， 發現從肝癌前期到演變成肝癌的過程， AR 蛋白表現量會增加， 伴隨著 miR-216a 表現上升及 TSLC1 表現下降， 具顯著相關。 本研究因此指出一雄激素訊息傳遞路徑促進 miR-216a 之轉錄進而降低抑癌基因 TSLC1 表現之調控機轉， 對於肝癌形成早期提供了一個新穎的分子機制。