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鉤端螺旋體及野生動物肉品鑑定技術開發

為了解決sp行動電源的問題，作者徐筠修 這樣論述：

鉤端螺旋體病是由鉤端螺旋體菌造成的一種全球性人畜共通傳染病。在台灣，鉤端螺旋體病為一地方性疾病，其發生率在颱風季節 (主要為七、八月份) 時常有成長的趨勢。台灣居民、流浪犬、牛隻、豬隻、小型哺乳類與嚙齒類動物，皆曾進行鉤端螺旋體發生率之研究，唯獨貓隻鉤端螺旋體感染情況尚無紀錄，因此本研究調查了台灣南部貓隻鉤端螺旋體的感染情況，共採集南台灣 233 隻貓隻（159 隻流浪貓與 74 隻家貓），其中 9.3%血清抗體呈現陽性反應 (21隻)；分子檢測結果，血清核酸陽性為 19.1% (25隻)，尿液核酸陽性為 67.8% 隻 (80隻)。為了加速鉤端螺旋體的檢測與分型，本研究應用環形核酸增幅法（

loop mediated isothermal amplification; LAMP）增幅鉤端螺旋體的 lipL32 片段，並使用聚合酶鏈鎖反應結合限制片段長度多態性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism; PCR-RFLP），進行鉤端螺旋體菌之分型。lipL32 LAMP 的診斷敏感性與特異性分別為 91.67% 和 100%， 其不僅具有高度敏感性與特異性，對反應條件也相對較不要求，因此非常適合於資源不足之國家或缺乏設備的現場使用。本篇研究所發表之 PCR-RFLP ，共可區分出六株不同基因

型的鉤端螺旋體，本法不僅可作為鉤端螺旋體病之初步篩檢測驗，也可將環境中或臨床上分離出的菌種進行分型。本論文另一研究主題為建立肉品來源之鑑定方法，並提供肉品稽查人員於現場使用。針對常見被非法食用的台灣野生動物，包括台灣長鬃山羊、台灣山羌、台灣白鼻心、台灣獼猴與台灣穿山甲，共建立五套結合重組酶聚合酶增幅法（recombinase polymerase amplification; RPA）與側流試紙（lateral flow strip; LF strip）的肉品檢測系統，此系統可有效增幅生肉與各種烹煮熟肉的核酸，並與非目標物種無交叉反應。為了讓 RPA-LF 檢測系統可在現場使用，作者也利用行動

電源與 USB 咖啡加熱器，建構出一攜帶式加熱平台。整個肉品的 RPA-LF 檢測，從 DNA 萃取增幅到結果判讀，不需要任何複雜昂貴之機器設備，可在現場使用，且於 20 分鐘內完成，此 RPA-LF 檢測系統，不僅敏感性與特異性皆高，且操作簡單，讓非專業人員可於稽查現場，駕輕就熟的使用本技術鑑定肉品種類來源。