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Doxorubicin合併硒對人類三陰性乳癌細胞株MDA-MB-231的抗癌活性及分子機制之探討

為了解決tcr advanced pro 0 d的問題，作者濮采婕 這樣論述：

三陰性乳癌 (Triple-Negative Breast Cancer﹐TNBC) 患者對於化療藥物比非三陰性乳癌患者有較佳敏感性。然而，TNBC對於化療具有高度的抗藥性、預後很差、與復發率高。小紅莓 (Doxorubicin, Dox) 雖為TNBC的第一線治療藥物，極易產生抗藥性及嚴重副作用。如何維持治療效果及降低高劑量 Dox 引起的副作用，是一重要課題。硒 (Selenium, Se) 為一必須微量礦物質，具有抗氧化、促氧化與抗癌特性，並且對於潛在的抗癌標靶蛋白具有調節作用。因此，本論文乃探討低劑量Dox 合併Se是否有加成作用，並且比起單獨Dox是否有更好的抗癌作用。預備實驗部分

，發現MDA-MB-231細胞與 0.25 ug Dox/ml 培養24 小時、48小時及72小時後，相對於未添加 Dox的細胞，其存活率分別為77.7、64.7及57.1%。進一步比較0.25 ug Dox/ml合併不同的Se (0, 750, 1000, 1500 ng Se/ml) 濃度處理對細胞的存活率，發現其存活率無論在24 小時或48小時隨著 Se劑量增加而明顯降低。在正式實驗部分，將細胞分成CON (未添加Dox/Se)、DOX (0.25 µg Dox/ml)、DOX-Se750 (0.25 µg Dox+750 ng Se/ml)、DOX-Se1000 (0.25 µg Do

x+1000 ng Se/ml)及DOX-Se1500 (0.25 µg Dox+1500 ng Se/ml) ，24及48小時處理，觀察其存活率、硒蛋白(selenoprotein, Sel) 表現、氧化壓力相關指標以及PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin signaling、Hippo pathway、PD-1/PD-L1signaling 相關蛋白表現。結果發現Sel-P/Sel-N/Sel-W的蛋白表現量，無論在24或48小時，DOX-Se1000組及DOX-Se1500組明顯高於CON 及 DOX組，並且DOX-Se1500組的蛋白表現在48小時，均明顯比DOX-Se10

00組高。以螢光染色檢測ROS發現，DOX-Se1000組及DOX-Se1500組的ROS螢光強度較CON 及 DOX組高。而氧化壓力反應相關蛋白如p-Nrf2的表現量，DOX-Se1000組及DOX-Se1500組均明顯比CON 及 DOX組低，並且在DOX-Se1500組表現量最少。兩組在SOD1及GPx 表現量，亦明顯低於CON 及 DOX組。至於兩組的SOD2的表現量，在24小時明顯比CON 及 DOX組低；而在48小時明顯比CON 及 DOX組高。致癌信號路徑 (PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin及HIPPO pathway) 標記的蛋白表現量在Dox合併Se的處理下

，p-PI3K/p-AKT/p-GSK-3β/β-catenin/p-ser552-β-catenin、YAP及TAZ之表現量，經 Dox/Se 處理後均明顯低於CON 及 DOX組；而GSK-3β、p-Ser33, 37-Thr41-β-catenin、p-MST、p-LATS、p-YAP、p-TAZ之表現量，DOX-Se1000組及DOX-Se1500組明顯比較高。在血管新生相關蛋白標記部分，DOX-Se1000組及DOX-Se1500的 HIF-1α、VEGF 的表現量比 CON 及 DOX 組低。此外，兩組的抗凋亡蛋白 (Bcl2、p-Bad) 表現量24及48小，均顯著低於 DOX

及 CON 組；而促凋亡蛋白 (cleaved Caspase 3、cleaved Caspase 8、cytoplasm cytochrome c、p-Bcl2、Bax) 相關標記的表現量顯著比 DOX 及 CON 組高。免疫檢查點標記PD-1/PD-L1的蛋白及mRNA表現量，經 Dox/Se 處理後，都明顯比 CON 及 DOX 組低。綜合以上結果顯示，DOX合併Se處理，呈現 Se劑量依賴的抑制MDA-MB-231細胞存活率與顯著的細胞凋亡誘導細胞的硒蛋白與氧化壓力反應、及調控PI3K/AKT/β-catenin/ GSK3β、HIPPO及PD-1/PD-L1路徑有關。