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國立臺灣大學 農業化學研究所 莊榮輝所指導 陳安娜的 甘藷塊根澱粉磷解脢降解路徑的探討-與Proteasome的結合關係 (2000),提出榮 立 CBR250RR關鍵因素是什麼,來自於甘藷、澱粉磷解脢、降解。
而第二篇論文國立臺灣大學 農業化學研究所 李平篤所指導 陳勁中的 甘藷葉蔗糖磷酯合成酶之生化學研究 (2000),提出因為有 蔗糖磷酯合成酶的重點而找出了 榮 立 CBR250RR的解答。
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甘藷塊根澱粉磷解脢降解路徑的探討-與Proteasome的結合關係
為了解決榮 立 CBR250RR 的問題,作者陳安娜 這樣論述:
Proteasome 是真核細胞中重要的蛋白質水解系統,它可以降解被 ubiquitin 標定的蛋白質,藉此維持細胞的正常生理,或可能具有調節酵素活性或細胞內各種生理反應的功能。本論文所研究的甘藷塊根L-型澱粉磷解脢 (L-form starch phosphorylase, L-SP),在其分子的中央部份,比動物的肝醣磷解脢多出一段由 78 個胺基酸所組成的片段 (簡稱L78),由於 L78 上具 PEST site 的降解信息,加上 L-SP 分子 N-端有與 cyclin A/B 類似的 destruction box (cyclin A/B 已被證實經由 ubiquitin-prot
easome 流程所降解),造成了 L-SP 極易降解,形成分子量約 50 kD 的一群蛋白質片段 (統稱F50)。我們在進行 L-SP 電泳片的活性染色時,發現有一比正常 L-SP 分子量高很多的色帶 (大約 650~670 kD,簡稱HX),藉由親和性層析管柱的吸附實驗,證明此色帶應該是甘藷塊根中 L-SP 與 proteasome 互相結合所造成,而proteasome 似乎結合了 L-SP 分子的 N-端。Proteasome 抑制劑 MG132 與 lactacystin,會延緩 L-SP 被甘藷塊根粗抽取液的降解,顯示 L-SP 的降解可能與 proteasome 有關。另外,SD
S的加入會加強 HX 的降解現象,可能是 SDS 促進proteasome 活性所致。以基因表現方法,從大腸桿菌中表現並產生之 L78 片段,會被甘藷塊根中的 proteasome 降解,顯示 proteasome 確實可作用在 L78 序列,這和先前 L-SP 降解模式的假說是相符合的。
甘藷葉蔗糖磷酯合成酶之生化學研究
為了解決榮 立 CBR250RR 的問題,作者陳勁中 這樣論述:
蔗糖磷酯合成酶(sucrose phosphate synthase) 是蔗糖生合成中一個極為重要的調控酵素,本論文以甘藷葉為材料,利用丙酮粉末法進行蔗糖磷酯合成酶酵素的粗萃取,再經過陰離子交換層析 (DEAE-Sephacel chromatography)、24% PEG 沉澱、親和層析 (w-aminohexyl-Sepharose 4B chromatography)、快速蛋白質分離層析 (FPLC/Mono Q HR 5/5 and Superose 6 HR 10/30 chromatography) 純化步驟處理後,可以得到部分純化之蔗糖磷酯合成酶,其純化倍率為 202,而回收
率為0.42%。 關於部分純化之蔗糖磷酯合成酶的生化特性:酵素原態分子量為 240 kD,酵素最適反應溫度為 37℃,最適反應 pH 為7.5。其酵素活性會受鈣、鎂、鋅、錳離子及 ATP、GTP、ADP、NAD 的活化,但會受到鈉、鉀、汞離子及 CTP、UTP、UDP、Glucose、Cibacron blue 3GA、1-Deoxynojirimycin 的抑制。甘藷葉蔗糖磷酯合成酶屬於第二大類之蔗糖磷酯合成酶,其會受到葡萄糖-6-磷酯 (G6P) 與無機磷 (Pi) 的異位調控,蔗糖磷酯合成酶對基質 Fru-6-P 之 Km 值為 3.8 mM,而對基質 UDPG 之K
m 值為 25 mM。但當有 G6P 存在下,會使蔗糖磷酯合成酶對兩基質之 Km值下降,而當有 Pi 存在下,則會使蔗糖磷酯合成酶對兩基質之 Km 值上升,但是 G6P 與 Pi 皆不會影響蔗糖磷酯合成酶的最高反應速率 (Vmax)。
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