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利用Pichia pastoris異源表達蟻巢傘菌漆氧化酶以及其漆氧化酶受質輪廓

為了解決氧化銅sds的問題，作者翁仲毅 這樣論述：

漆氧化酶(EC 1.10.3.2)屬於多銅氧化酶的一員(MCOs)，以銅離子為酵素催化中心，透過自由基的產生可氧化多種酚類及非酚類化合物，以芳香族的酚類或胺類化合物為受質，產生的副產物只有水。自然界中木質素分解需要漆氧化酶的參與，白腐型真菌其木質素分解能力較其他微生物高，因此成為漆氧化酶主要來源。在工業應用上已廣泛使用在造紙工業、汙水處理、脫色處理、紡織工業等，是一極具發展潛力的酵素。自然界中與白蟻共生的蟻巢傘菌以漆氧化酶協助宿主分解木質纖維，且來自不同菌株的漆氧化酶其受質都不盡相同，這也顯示漆氧化酶具有高度功能多樣性。本實驗室利用養菌白蟻的共生真菌蟻巢傘菌(Termitomyces)作為多

樣式漆氧化酶的來源，選殖台灣的 Termitomyces type Y 產生的每一種漆氧化酶異構型的核酸序列，利用異種宿主Pichia pastoris 表現生產酵素。本研究使用之菌株來源為，經實驗室團隊建構基因模型獲得漆氧化酶cDNA序列，且依據Pichia pastoris密碼子使用偏好，設計重組漆氧化酶基因CYL5348，委託生技公司合成基因後連接pPICZαA表現載體。實驗結果顯示，使用Pichia pastoris KM71H菌株，添加0.5％甲醇具有較佳活性，另添加 0.4mM硫酸銅的第7天培養上清液，比起完全沒添加硫酸銅的活性提高約26倍，根據Native-page以及 SDS-

PAGE推測蛋白質大小約80kDa，以ABTS為受質，Native-PAGE上觀察到呈色反應。利用Protino Ni-IDA 1000 column管住純化，回收率為75％，比活性（U/mg）提高約85倍。以ABTS作為受質，分光光度計測得的反應數據計算酵素動力學參數，結果為Km =0.0613 mM和kcat=21.87 sec-1，以溶氧度計測得的酵素動力學參數，結果為Km =0.3022 mM和kcat= 3.069sec-1。接著以溶氧度計測得不同受質之酵素動力學參數，並以主成份分析(PCA)的方式將其結果分群，將漆氧化酶與不同受質間的關係使用數值來表示，或稱漆氧化酶的受質輪廓。

薰衣草精油對銅逆境下櫻桃蘿蔔之抗氧化機制探討

為了解決氧化銅sds的問題，作者羅賀 這樣論述：

銅元素是植物必需的微量元素且在植物生長以及發育過程扮演重要角色。隨著許多人類活動如工業廢水的排放、銅礦業以及現代農業的發展使得土壤中累積過量的銅影響農作物的產量，在世界各地消費的櫻桃蘿蔔也是其中之一。近年來植物物種間的化感潛力漸漸地被考慮在農業上的應用，化感作用是指植物在接受特定環境刺激如逆境時會釋放特定化學物質來抵禦環境的變化，而這些物質會以不同途徑如揮發性有機化合物等方式釋放出去並被鄰近植物接收進而影響其生長或者防禦模式。在本研究中，薰衣草精油氣味可以回復蘿蔔幼苗在銅逆境下的生長抑制，以及減緩銅誘導的活性氧化物產生，甚至可預防根部脂質過氧化以及細胞死亡的發生。薰衣草精油氣味可以進一步提升

銅逆境下櫻桃蘿蔔幼苗莖部多酚類及穀胱甘肽的含量以及根部類黃酮的含量，並提升抗壞血酸-榖胱苷肽循環中莖部 GPx 以及根部 CAT、GPx、APX 以及 DHAR 酵素活性等等。綜合以上結果顯示出預薰衣草精油氣味可以提高銅逆境下櫻桃蘿蔔幼苗的抗氧化能力、減緩氧化壓力的發生並促進植物的生長。